171512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nikotinamid-adenin-dinukleotid-származékok előállítására
3 171512 4 jelentésű —, illetve a reakcióvázlaton a III általános képletű vegyület mutatja. Az így előállított termék rendeződik át az V általános képletű funkciós származékká, mely a C általános képletű csoportot tartalmazza. Az átrendeződés körülményei: 5 7-11,5 pH, 5—80 C°, előnyös körülmények: 11,2 pH és 75 C°. A C általános képletű csoportban R jelentése megegyezik az I általános képlettel kapcsolatban megadottakkal. Nikotinamid-csoport egyidejű jelenléte miatt azt az átrendeződés előtt 10 redukáljuk. A találmány szerinti NAD-származékok előállítása érdekében a NAD-ot az I általános képletű savepoxiddal vagy észterepoxiddal — ahol R jelentése a>fenti - vízben vagy valamely vízzel keveredő 15 szerves oldószer vizes elegyében perklórsav segítségével beállított 6-os pH-n reagáltatjuk. A reakció során az l-es helyzetű nitrogénatomot alkilezzük. Az így előállított termék nikotinamid-csoportját redukáljuk. Ezután következik az átrendeződési 20 reakció, amelynek során képződik az V általános képletű 6-alkilamino-adenint tartalmazó termék. Végül az V általános képletű vegyület nikotinamid-gyűrűjét dehidrogenázzal újraoxidáljuk és így 25 megkapjuk a funkciós VI általános képletű NAD-ot. Meg kell jegyezzük, hogy a NAD adenin-csoportjának l-es helyzetben történő alkilezését kivéve, a többi reakciót ugyanazon reakcióedényben hajthatjuk végre, anélkül, hogy az inter- 30 mediereket izolálnánk. A III—VI általános képletekban R és R' jelentése megegyezik a már megadottakkal. A műveleti feltételek és részletek világossá válnak az alábbi példák bemutatásával, amelyek csak 35 a találmány jobb megvilágítására szolgálnak, de annak oltalmi körét nem korlátozzák. 1. példa 40 3,4-Epoxi-but ánsav 9,46 g (110 millimól) 3-buténsav 30 ml metilénkloridban készített, 0C°-ra hűtött oldatához, 45 110 millimól 80%-os perecetsavat adunk (amelyet H. Krimm által a 2 813 896 sz. Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban javasolt módon állítunk elő). A reakciókeveréket vízfürdőben szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni. Négy napos 50 szobahőmérsékleten való keverés után további 25 millimól perecetsavat adagolunk. A második perecetsav adagolás után 24 órával végzett gázkromatográfiai vizsgálattal észleljük a 3-buténsav eltűnését. A reakcióelegyet ezután 50 C°-on 20Hgmm 55 nyomáson koncentráljuk, és a maradékból az ecetsavat az előbbiekben megadott hőfokon és vákuumban végzett 5 egymásutáni ciklohexános és 3 toluolos mosással teljesen eltávolítjuk. így 10,27 g 3,4-epoxibutánsavat állítottunk elő, amelynek di- 60 azometánnal való észterezése után mért gázkromatográfiai tisztasága 90%-os volt. Az észterezett termék NMR vizsgálata deuterobenzolban (C6 2H 6 ), tetrametil-szilán (TMS) belső standarddal: 65 62.43 (1H, dd, 7-CH), 2.46 (2H, d, a-CH2 ), 2.68 (1H, dd, 7-CH), 3.12 (1H, m, 0-CH), 3.62 (3H, s, CH3 ). Gáztömeg vizsgálat: m/e 115, 85, 74, 59, 43. 2. példa 3,4-epoxi-vajsav-metilészter 25,5 g (255 millimól) 3-buténsav-metilészter 100 ml dietiléterben való 0C°-ra lehűtött oldatához lassú keverés közben 406 millimól 80%-os perecetsav-oldatot adunk. A reakció szobahőmérsékleten 10 nap alatt játszódik le. Ezután 100 ml metilénkloridot adagolunk és a szerves keveréket kis mennyiségű telített nátriumhidrogénkarbonát-oldattal addig mossuk, míg az semleges lesz. A szerves fázist vízmentes nátriumszulfát fölött szárítjuk, és 45 C°-on, atmoszférikus nyomáson betöményítjuk. A maradékot 0,02 Hgmm-es vákuumban desztilláljuk, és a 30 C°-on forró terméket összegyűjtjük. így 11,38 g 3,4-epoxi-vajsav-metilésztert állítunk elő, amely az NMR- és a gázkromatográfiás vizsgálat szerint tiszta. A gázkromatográfiás vizsgálatot a diazometánnal való észterezés termékén hajtjuk végre. 3. példa Nikotinamid-6-(2-hidroxi-3-karboxipropilamino)-purin-dinukleotid (VI általános képlet, R = H) előállítása lg (1,51 millimól) NAD 6 ml kétszer desztillált vízben való oldatához 42,1 millimól 3,4-epoxi-vajsav-metilésztert adunk és 6 n nátriumhidroxid-oldat adagolással 0C°-on 6-os pH-t állítunk be. A keverék pH-ját továbbra is ezen az értéken tartjuk. A reakcióeleggyel teli lombikot a fénytől védve tároljuk, és pH-mérővel összekötött mágneses keverővel látjuk el. A reakcióelegy 6-os pH-értékét 1 n perklórsawal megtöltött automata büretta segítségével tartjuk fenn a teljes reakcióidő alatt. 8 napos szobahőmérsékleten történő keverés után . a reakciót leállítottuk. A reakcióelegyet 4-es pH értékre savanyítjuk 1 n perklórsawal, és a terméket 10 térfogatrész aceton adagolásával kicsapjuk. Az elegyet -20 C°-on egy éjszakán át állni hagyjuk, hogy a csapadék leülepedjen, majd centrifugálással összegyűjtjük a csapadékot és végül egy forgó párologtatóban megszárítjuk. A termék (III általános képlet, R = H) In nátriumkarbonátos oldatának ultraibolya spektruma abszorpciós csúcsot mutatott 259 m/i-nál és két emelkedést 267 és 290 ny/-nál, amely az Ni atomon alkilezett adenin magra jellemző. A terméket oly módon izoláltuk, hogy 60 ml 1%-os nátriumhidrogénkarbonátban oldjuk, 2
