171400. lajstromszámú szabadalom • Eljárás csökkent amiláz-inhibitor tartalmú szacharáz-inhibitor előállítására

171400 8 Maltóz- 3 nap után 5 nap után koncentráció AIE/ml SIE/ml AIE/ml SIE/ml Hozam l,4g, 6000SIE/g aktivitással, ami az aktivitásra számítva 70%-os hozamnak felel meg. 0 363 11,2 444 8,8 0,5 479 12,7 614 11,3 1,0 383 13,6 688 12,5 1,3 337 15,7 725 12,7 1,8 274 16,6 678 14,4 2,2 287 16,8 600 15,5 3. példa Az 1. példában megadott összetételű tápközeget, amely az ott megadott összetételen felül még 1,3% maltózt is tartalmaz, az 1. példában leírt módon beoltunk és inkubáltatunk. így olyan fermentlevet kapunk, amely 2 napi fermentáció után 14,4 SIE/ml és 81 AIE/ml aktivitást, 4 napi fermentáció után pedig 14,5 SIE/ml és 580 AIE/ml aktivitást tartalmaz. 4. példa "Egy egyliteres Erlenmeyer-lombikban 120 ml oly tápközeget, amely 3% glükózt 1% maltózt, 0,5% kazeinhidrolizátumot, 1,3% élesztőkivonatot, 0,3% kalcium-karbonátot, és 0,3% dikálium-hidrogén-foszfátot tartalmaz, sterilizálás előtt nátrium-karbonáttal 7,2 pH-értékre állítunk be, majd 30 percig sterilizáljuk 121 C° hőmérsékleten, azután az SE 50 törzs 3% glicerint, 3% szójalisztet és 0,2% kalcium-karbonátot tartalmazó tápközegben, rázógépben 28 C° hőmérsékleten történő 3 napos inkubáltatása útján kapott inokulum-kultúra 4 ml-ével beoltunk, azután 24 C° hőmérsékleten lefolytatjuk a fermentációt, így 4 nap alatt olyan fermentlevet kapunk, amely 22 SIE/ml és 500 AIE/ml aktivitást tartalmaz. 5. példa Az SE 50 törzsnek a 4. példa szerint fermentált barnaszínű fermentlevéből 500 ml-t féltömény (30-40%-os) salétromsavval 2,5 pH-értékre állítunk, majd 5g aktívszenet adunk hozzá és 10 percig keverjük. Ezután percenként 10 000 fordulattal 15 percig centrifugáljuk, a tiszta folyadékot elkülönítjük, ammóniával semlegesítjük, majd rotációs bepárlóban 20 Hgmm nyomáson 50 ml térfogatra bepároljuk és az így kapott tömény oldathoz 50 ml acetont adunk az inaktív alkotórészek kicsapása céljából. Leszűrjük és a tiszta szűrletet, keverés közben becsepegtetjük 400 ml acetonba, majd a kivált csapadékot szívószűrőn leszűrjük, acetonnal és éterrel mossuk, végül vákuumban, szobahőmérsékleten megszárítjuk. 5 6. példa Az SE 50 törzsnek a 4. példa szerint fermentált kultúrájából, amely 22 000 SIE/liter aktivitást tartalmaz, 500 ml mennyiséget az 5. példában leírt 10 módon feldolgozunk, azzal az eltéréssel, hogy a kicsapást nem acetonnal, hanem etanollal végezzük. Hozam 0,6 g 7000 SIE/g aktivitással, ez az aktivitásra számítva 38% körüli hozamnak felel meg. 15 7. példa 1 liter sötétbarna színű fermentlevet, amelyet a 20 4. példában leírt módon kaptunk, és amelynek aktivitása 21 000 SIE/liter, féltömény salétromsavval 2,5 pH-értékre állítunk be, 10 g aktívszenet és 10 g szűrési segédanyagot (Clarcell) adunk hozzá és 10 percig keverjük. Azután egy 1 -2 cm vastag 25 „Clarcell" réteggel töltött szívószűrőn leszűrjük és a szűrletet ammónium-hidroxioldattal semlegesítjük. A szűrőn maradt szilárd anyagot kiselejtezzük, a kapott semleges szűrlethez, amely 19 000 SIE/liter aktivitást mutat, 1,5% aktívszenet adunk és 10 percig keverjük, 30 majd ismét leszívatjuk. A szűrlet már csak körülbelül az eredeti aktivitás 10%-át tartalmazza, ezt a szűrletet kiontjuk, (Ha még a szűrletben maradt aktivitást is ki akarjuk nyerni, akkor 0,5% aktívszénnel újbóli adszorbeáltatást végzünk és az aktívszenet egyesítjük 35 az első adszorbeáltatás aktívszenével.) A szacharáz-aktivitást tartalmazó aktívszenet kevés vízzel mossuk, majd 50-50 ml 50%-os acetonnal, 2,5 pH-értéken (ezt sósavval állítjuk be) 10-10 percig 40 háromszor deszorbeáltatjuk« Mindegyik deszorpciós művelet után a folyadékot szívó szűrő segítségével elkülönítjük és a kapott 3 deszorbeátumot egyesítjük. Ezt a folyadékot rotációs bepárlóban 10 ml térfogatra bepároljuk és az így kapott viszkózus koncentrá-45 tumhoz keverés közben ugyanilyen térfogatú (10 ml) metanolt adunk. Az ennek hatására kivált csapadékot centrifugálással elkülönítjük. A tiszta, világosbarna 50%-os metanolos oldatot azután becsepegtetjük 250 ml (= 12,5 térfogatrész) abszolút acetonba, 50 keverés közben. A kiváló csapadék jól ülepszik, a folyadékot — amely sötétsárga színű — dekantálással eltávolítjuk, a szilárd maradékot abszolút acetonnal felvesszük, szívószűrőre visszük és mossuk, majd leszívatás után még abszolút acetonnal és ezt 55 követően éterrel mossuk. Az így kapott terméket vákuumban szobahőmérsékleten megszárítjuk. Hozam: 850 mg, 12 500 SIE/g aktivitással, ami a fermentleben jelenlevő aktivitásra számítva kb. 60 51%-os hozamnak felel meg. A fenti eljárás során az egyes műveletek után kapott fázistermékek aktivitását és az ennek megfelelő termelési hányadokat az alábbi táblázatban 65 foglaltuk össze. 4