171243. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új dotriakontapeptidamidok előállítására
7 171243 8 Az aminosav- és/vagy a peptidegységek összekapcsolása például oly módon történik, hogy valamely védett a-aminocsoportot és véghelyzetű aktivált karboxilcsoportot tartalmazó aminosavat vagy peptidet valamely szabad á-áminocsoportot és szabad vagy védett, például észterezett vagy amidált véghelyzetű karboxilcsoportot tartalmazó aminosavval vagy peptiddel átalakítunk, vagy valamely aktivált a-aminocsoportot és védett véghelyzetű karboxilcsoportot tartalmazó aminosavat vagy peptidet valamely szabad véghelyzetű karboxilcsoportot és védett a-aminocsoportot tartalmazó aminosavval vagy peptiddel átalakítunk. A karboxilcsoport például valamely savaziddá, savanhidriddé, savimidazoliddá, savizoxazoliddá vagy valamely aktivált észterré, mint cián-metil-észterré, karboxi-metil-észterré, p-nitro-fenil-tio-észterré, p-nitro-fenil-észterré, 2,4,5--triklór-fenil-észterré, pentaklór-fenil-észterré, N-hidroxi-szukcinimid-észterré, N-hidroxi-ftálimid-észterré, 8-hidroxi-kinolin-észterré, N-hidroxi-piperidin-észterré történő átalakítással, vagy valamely karbodiimid (adott esetben N-hidroxi-szukcinimid vagy valamely nem helyettesített, vagy például halogénatommal, metil- vagy metoxicsoporttal szubsztituált 1-hidroxi-benzotriazol hozzáadásával), vagy N,N'-karbonil-diimidazol reakciójával, az aminocsoport például foszfit-amid reakciójával aktiválható. A leginkább használatos módszerként a karbodiimidmódszert, az azidmódszert, az aktivált észter módszerét és az anhidridmódszert, továbbá a Merrifield-módszert és az N-karboxianhidrid vagy az N-tio-karboxianhidrid módszerét említjük. A kiindulási anyagok előállításánál előnyös olyan szekvenciából kiindulni, mely az első 10 N-terminális aminosavat magába foglalja, és ezt az N-véghelyzetet az összes további szekvenciával, előnyösen Weygand— Wünsch szerint kondenzálni. Lehetséges azonban az említett N-terminális szekvenciát például egészen a 28. aminosavig (glicin), szabad véghelyzetű karboxilcsoporttal összekapcsolni és az oktakozapeptidet a 29—32. aminosav tetrapeptidjével, például Weygand—Wünsch szerint kondenzálni. A következőkben példaként az I általános képletű peptidek előállításának egyik előnyös foganatosítási módját magyarázzuk. Az N-terminális dekapeptid (1—10) például a Helv. 53, 556 (1970) szerint állítható elő (Rj = L-metionilcsoport). Az N-terminális 1—10. szekvenciával összekapcsolt 11—32. aminosavakat magába foglaló szekvenciát például a 11—16., 17—20., 21—23., 24—28. és a 29—32. szekvenciákból állítjuk össze. A 24—28. szekvenciát például úgy állítjuk elő, hogy előnyösen mindenkor az aktivált észter módszere szerint a 27. aminosavat (Thr) a 28. aminosavval (Gly) összekapcsoljuk, ezt a 2-es szekvenciát a 26. aminosavhoz (Asn) kapcsoljuk, a kapott 3-as szekvenciát a 25. aminosavval (Thr), és végül a 24. aminosavval (Gin) összekötjük. A treoníncsoport hidroxilcsoportja emellett például terc-butil-éter-csoporttal megvédhető. A glutamincsoport védett aminocsoportjával és a glicincsoport szabad karboxilcsoportjával rendelkező 24— 28. szekvenciát a H—Val—Gly—Ala—Pro—NH2 29— 32. szekvenciával [Helv. 53, 2135 (1970)] előnyösen karbodiimid-N-hidroxi-szukcinimid-módszer szerint kapcsoljuk össze. A 24—32. szekvencia glutamincsoportján levő amino-védőcsoport lehasítása után, előnyösen karbodiimid módszerrel N-hidroxi-szukcinimid jelenlétében a Z— —Thr(tBu)—Phe—Pro—OH 21—23. szekvenciát [Helv. 53, 2135 (1970)] a 24—32. szekvenciához kapcsoljuk. 5 A Z—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—NH—NH2 17— 20. szekvencia [Helv. 53, 2135 (1970)] és a Z amino-védőcsoporttól mentesített 21—32. szekvenciával történő összekapcsolása például azidmódszerrel történik. A 17—32. szekvencia aszparagincsoportján levő Z 10 amino-vődécsoport lehasítása után a szükséges 11—32. részlet felépítésére a Z—Thr(tBu)—Tyr(tBu)—Thr(tBu) —Gln-Asp(OtBu)—Phe—NHNH2 11—16. szekvenciát [Helv. 53, 2135 (1970)] előnyösen azidmódszerrel a 17—32. szekvenciára kapcsoljuk. 15 Az előbb leírt 11—32. szekvencia és a Boc— —Cys—Gly—Asn—Leu—Ser(tBu)—Thr(tBu)—Cys— —Met—Leu—Gly—OH 11—10 szekvencia [Helv. 53, 556 (1970)] összekapcsolása előnyösen karbodiimid-N 20 -hidroxi-szukcinimid-módszer szerint történik. A még jelenlevő valamennyi védőcsoport eltávolítása előnyösen trifluor-ecetsavval vagy tömény sósavval tönténik és így Asn26 —Thr 27 —kalcitonin-M-t kapunk. Az eljárásokkal az új vegyületeket bázis vagy savad-25 díciós sóik formájában kapjuk. A savaddíciós sókból a bázisok önmagában ismert módon felszabadíthatók. A bázisokból savakkal, melyek gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sók képzésére alkalmasak, ismét sók állíthatók elő. Ilyen szervetlen savak például a halo-30 gén-hidrogén-savak, mint a sósav vagy a hidrogén-bromid; perklórsav, salétromsav vagy a tiociánsav, kénsav vagy a foszforsavak; a szerves savak, mint a hangyasav, ecetsav, propionsav, glikolsav, tejsav, piroszőlősav, oxálsav, maionsav, borostyánkősav, maleinsav, fumár-35 sav, almasav, borkősav, citromsav, aszkorbinsav, hidroxi-maleinsav, dihidroxi-maleinsav, benzoesav, fenil-ecetsav, 4-amino-benzoesav, 4-hidroxi-benzoesav, antranilsav, fahéjsav, mandulasav, szalicilsav, 4-amino-szalicilsav, 2-fenoxi-benzoesav, 2-acetoxi-benzoesav, me-40 tánszulfonsav, etánszulfonsav, hidroxi-etánszulfonsav, benzolszulfonsav, p-toluolszulfonsav, naftalinszulfonsav, vagy a szulfanilsav. A találmány szerint előállított peptidek gyógyászati készítmények formájában kerülnek felhasználásra* Ezek 45 a készítmények a peptideket például intravénás, intramuszkuláris, szubkután vagy intranazális felhasználásra alkalmas szerves vagy szervetlen gyógyászati hordozóanyagokkal keverve tartalmazzák. A készítményekhez olyan anyagok jönnek tekintetbe, melyek a polipepti-50 dekkel nem reagálnak. Ilyen anyagok például a zselatin, agar-agar, tragant; cellulóz, például „Avicel" (mikrokristályos cellulóz) és a cellulózszármazékok, mint a karboxi-metil-cellulóz, cellulóz-éter, mint a metil- vagy etil-cellulóz; polialkilén-glikol, mint a propilén-glikol; 55 víz; egy- vagy többértékű alkoholok, mint az etanol, izopropanol, glicerin, hexit; növényi olajok és más zsírsavészterek, mint a földidió-olaj, gyapotmagolaj, mandulaolaj, olívaolaj, ricinusolaj, etil-oleát, izopropil-mirisztát, izopropil-palmitát, „Cetiol V" (folyékony zsír-60 alkohol olajsav-észtere), „Miglyol" vagy „Labrafac" (8—12 szénatomszámú zsírsavak triglicerid keverékei), „Labrafil M 2735" vagy „Labrafac WL 1219 (polioxietilén-zsírsav-észterek és glicerin keverékei), „Arlacel" (szorbitán-zsírsav-észter), „Tween" (polioxietilén-szor-65 bitán-monooleát), szilikonolajok, mint a dimetil-szili-4
