171233. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikus hatású figaroesav komplex előállítására

171233 9 10 érünk el, ha az extrakciót a 4,5—5,0 pH-tartományban metil-izobutil-ketonnal végezzük. Az extraktumhoz előnyösen valamely szűrési segédanyagot adunk, majd az elegyet leszűrjük. A szerves fázist betöményítjük és valamely megfelelő antiszolvenssel (oldódást gátló anyaggal), például éterrel felhígítjuk, hogy kicsapjuk a figaroesav-komplexet. Ha a kinyerést lúgos körülmények között végezzük, a bíborszínű figaroesav-komplexet a vörös-narancs színű szabad savvá alakíthatjuk oly módon, hogy a komplexet vízben feloldjuk és az oldatot a sav-komplex kicsapása céljából megsavanyítjuk. A csapadékot szűréssel vagy szerves oldószerekkel végzett extrahálással nyerhetjük ki. A figaroesav-komplex tulajdonságai az alábbiak. A figaroesav-komplexnek elnevezett antibiotikum komplex szabad sav alakjában narancsvörös színű amorf szilárd anyag. A viszonylag apoláris oldószerekben, így éterben, benzolban és alifás szénhidrogénekben, például n-hexánban nem oldódik, rövidszénláncú alkoholokban (metanol, etanol, n-butanol, 2-propanol), acetonban, tetrahidrofuránban, és dioxánban nagyobbrészt oldódik és teljesen csak a nagyon poláris oldószerekben, így a dimetilformamidban és dimetilacetamidban oldódik. Lúgos közegben végzett kinyerés esetén a komplex sötét bíbor színű, ami azt jelzi, hogy a savas alak anionos alakká alakult át. A figaroesav-komplex bázisokkal könnyen sókat képez. A komplex körülbelül 2,5% nitrogént tartalmaz az elemzési eredmények szerint. Vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldatban és báriumhidroxid-oldatban vörösibolya, illetve kékszínű oldatot adva oldódik. Magnéziumacetát alkoholos oldatával mély vörös színű, vörös fluoreszcenciát mutató oldatot és vas(III)klorid alkoholos oldatával fekete színű (hígítva narancsbarna színű, ibolya fluoreszcenciát mutató) oldatot ad. A komplex Tollens-próbája pozitív, a karbazol- és ninhidrinpróbát azonban a színezék színe elfedi. Savas cinkpor, nátriumhidrogénszulfit és hidrogénperoxid hozzáadása nem eredményez színváltozást. Lúgos cinkpor hozzáadásakor a szín ibolyából kissé vörösbe megy át, és lúgos nátriumhidrogénszulfit hatására a szín gyorsan vörösre változik. Lúgos hidrogénperoxidnak nincs hatása, csak nagy feleslegben; ekkor a szín ibolyából rózsaszínre halványul. A figaroesav-komplex infaravörös és ultraibolya spektruma azt mutatja, hogy a komplex antraciklin komponensek keveréke. Az 1. ábrán látható infravörös spektrum (KBr pasztilla) fő sávjai 2,94 (széles), 3,4, 6,04—6,13, 6,18, 6,3, 6,95 (széles), 7,1 (széles), 8,1 9,3, 9,5 és 9,7 [i,-on jelennek meg. A komplex ultraibolya abszorpciós spektrumát mutatja savas és lúgos körülmények között a 2. ábra. A 2. ábrán szereplő adszorpcióképességet aB=- egyenlettel határozzuk meg, ahol be A az adszorpció, b a küvetta vastagsága cm-ben és c a minta koncentrációja g/liter-ben. 50 [i.g/ml koncentráció esetén 0,1 n sósavas metanolban a figaroesavkomplex abszorpciós csúcsai (folytonos vonallal jelölve) 233, 253, 287—288 (váll), 467 (váll), 480 (váll), 490, 511 (váll) és 524 (váll) mjJi-on jelennek meg. 0,1 n nátriumhidroxidos metanolban a komplex abszorpciós csúcsai (szaggatott vonallal jelölve) 238, 266—268 (váll) és 553 mfx-on vannak, A figaroesav-komplex biológiai aktivitásának adatai 5 az alábbiak. A figaroesav-komplex minimális gátló koncentrációit (MIC) in vitro számos mikroorganizmuson meghatároztuk a standard kémcső-hígításos módszerrel. Az alábbi IV. táblázatban szereplő eredmények azt mutat-10 ják, hogy számos Gram pozitív mikroorganizmus, élesztőgomba és három protozoon érzékeny az antibiotikumra. A Gram negatív mikroorganizmusok nem érzékenyek rá. 15 IV. táblázat A figaroesav-komplex antimikróbás spektruma Vizsgált j . mikroorganizmus MIC(fig/ml) Baktérium: Staphylococcus aureus A9537 1,6 Mycobacterium tuberculosis BCG A9579 25 Escherichia coli A15119 50 Pseudomonas aeruginosa A9843 >50 Proteus mirabilis A9900 >50 Salmonella enteritidis A9531 >50 Élesztőgomba: Candida albicans A9540 50 Trychophyton mentagrophytes A9870 >50 Microsporum canis A9872 >50 Protozoa: Histoplasma capsulatum Al 5056 6,3 Trichomonas vaginalis A20074 1,25 Trichomonas foetus A20075 0,31 Megvizsgáltuk a figaroesav-komplex bakteriofág 45 termelést indukáló képességét lizinképző Escherichia coli W 1709 törzsben. Szignifikáns indukciót figyeltünk meg 0,8 [Ag/ml-ig haladva lefelé. HeLa sejtekre gyakorolt citotoxikus hatás szövetkultúrában való meghat tarozására kémcső-hígításos protein vizsgálatot végez-50 tünk; a kapott ED50-érték 0,004 (xg/ml (a módszert az Antimicrobial Agents and Chemotherapy c. szakkönyvben írták le: 1966, 613—618., 1967.) A figaroesav-komplex számos tumor-rendszerre gya-55 korolt hatását is megvizsgáltuk rágcsálókon. Az alkalmazott módszerek részleteit a Cancer Research 22., 167—173. (1962) és Cancer Chemoth. Reports 3., 1—87. (3. fejezet) (1972) irodalmi helyeken ismertetik. Szolid tumorként egéren bőr alá átültetett Sarcoma 60 180-at figaroesav-komplexet tartalmazó fermentlével kezelve a komplex a tumor-átmérő növekedésének 37%os gátlását váltotta ki (a tumorsúly növekedésben 75%os gátlást mértünk). Ugyanezzel a fermentlével végezve a kezelést az L—1210 leukémiával rendelkező 65 egerek élettartama is megnövekedett, mégpedig a kont-5