171208. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-amino-3-metil-cef-3-ém-4-karbonsav-származékok előállítására
7 171208 8 5-ször extraháljuk körülbelül 200 ml hideg etilacetáttal és a kivonatokat egyesítjük. Az egyesített etilacetátos kivonatot csökkentett nyomáson 40 C° alatti hőmérsékleten körülbelül 200 ml-re betöményítjük és vízmentes nátriumszulfát felett éjszakán át 5 C°-on szárítjuk. A folyadékot szűrjük és a mardékot kis mennyiségű etilacetáttal mossuk. A szűrletet egyesítjük a mosófolyadékkal és a kapott folyadékot csökkentett nyomáson 40 C° alatti hőmérsékleten gyorsan 20 ml-re betöményítjük, majd a maradékot élénk keverés közben 120 ml petroléterbe csepegtetjük. A kapott elegyet hűtés közben centrifugáljuk és a felülúszót dekantálással elkülönítjük. Ezután a csapadékot petroléterben szuszpendáljuk és a keletkező szuszpenziót újból centrifugáljuk hűtés közben. A felülúszót dekantálással elkülönítjük és a csapadékot alumíniumoxid felett vákuumban szárítjuk. Ily módon 2,5 g halványsárga kristályos 3-acetoximetil-7ß-(5-karboxi-5-oxo-pentanoilamido)-3-cefem-4-karbonsavat kapunk (tisztasága 52%-os). TLC:Rf = 0,30 PPC:Rf = 0,52 2. példa 4 g 74,2%-os tisztaságú kristályos cefalosporin C nátriumsót és 3,3 g réz(II)acetátot feloldunk 120 ml vízben. A reakcióelegy pH-ja ekkor 3,9. Ehhez a reakcióelegyhez 1 óra leforgása alatt keverés közben szobahőmérsékleten cseppenként hozzáadunk 120 ml olyan vizes oldatot, amely 6,24 g glioxilsavat és 5,5 ml piridint tartalmaz. A reakcióelegy pH-ja a reakció befejezésekor 4,6. Ezután a reakcióelegy pH-ját 1 n kénsavval 3,0-ra állítjuk és 1 óra alatt 60 ml 15%-os vizes hidrogénperoxid-oldatot csepegtetünk az elegybe. Ezt követően a reakcióelegyet 10 percig tovább keverjük és a reakció befejezése érdekében az elegy pH-ját kénsavval 1,5-re állítjuk. A reakcióelegyet ekkor megelemezzük és megállapítjuk, hogy a 3-acetoximetil-7ß-(4-karboxibutanoilamido)-3-cefem-4-karbonsav nyers hozama 92%. Az elemzéssel 3-acetoximetil-7ß-(5-karboxi-5-oxopentanoilamido)-3-cefem-4-karbonsavat nem lehet kimutatni. A reakcióelegyet ezután 3-szor extraháljuk 500 ml etilacetáttal és a kivonatokat egyesítjük. Az egyesített etilacetátos kivonatot csökkentett nyomáson 40 C° alatti hőmérsékleten körülbelül 200 ml-re betöményítjük és éjszakán át vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Ezután az elegyet szűrjük és a maradékot kis mennyiségű etilacetáttal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékokat egyesítjük, majd a kapott folyadékot csökkentett nyomáson 40 Cc alatti hőmérsékleten 10 ml térfogatra betöményítjük és erőteljes keverés közben 200 ml petroléterbe csepegtetjük. A folyadékot centrifugáljuk és a felülúszót dekantálással elkülönítjük. A csapadékot ezután petroléterben szuszpendáljuk és a keletkező szuszpenziót ismét centrifugáljuk. A felülúszót dekantálással elkülönítjük, a csapadékot alumíniumoxid felett vákuumban szárítjuk és így 2,38 g halványsárga kristályos 3-acetoximetil-7ß-(4-karboxibutanoilamido)-3-cefem-4-karbonsavat kapunk. Tisztaság: 96,9%. 3. példa 1,5 g 74,2%-os tisztaságú kristályos cefalosporin C nátriumsót és 406 mg réz(II)szulfátot feloldunk 100 ml vízben. A reakcióoldat pH-ja 3,9. Ehhez az oldathoz minden 30 percben hozzáadunk 20 ml, összesen 100 ml olyan vizes oldatot, amely 2,3 g glioxilsavat és 1,5 ml trietilamint tartalmaz. Mindegyik hozzáadás után 10 perccel 3 ml 20%-os vizes hidrogénperoxid-oldatot adunk a reakcióelegyhez és az egészet keverés közben 30 percig reagálni hagyjuk. A reakcióelegy pH-ja a reakció befejeződésekor 3,5. A reakcióelegyet ezután további 30 percig keverjük, majd pH-ját kénsavval 1,5-re állítjuk a reakció megszakítása érdekében. A reakcióelegyet ekkor megelemezzük és megállapítjuk, hogy a 3-acetoximetil-7ß-(4-karboxibutanoilamido)-3-cefem-4* -karbonsav nyers hozama 87,8%. Ezt a reakcióelegyet a 2. példában leírt módon kezeljük és így 0,86 g halványsárga kristályos 3-acetoximetil-7ß-(4-karboxibutanoi1amido)-3-cefem-4-karbonsavat kapunk. Tisztaság: 95,1%. 4. példa Cephalosporium acremonium fermentációs folyadékot szűréssel megszabadítunk a sejtektől, savasán kezelünk (2,8-as pH-n) annak érdekében, hogy a benne lévő penicillin N-t elbontsuk, utána újból szűrjük és a maradékot mossuk. A szűrletet egyesítjük a mosófolyadékokkal és így 4,6 liter folyadékot kapunk, amely 3223 y/ml cefalosporin C vegyületet tartalmaz. Ezt a folyadékot szénnel töltött oszlopon átbocsátjuk és az aktívszénen adszorbeálódott alkotókat tartalmazó oszlopot vízzel mossuk és a kívánt frakciókat 7 liter 700 ml 0,3 n nátriumhidroxidot tartalmazó 3%-os n-butanollal eluáljuk. A frakciók pH-ját 6,0-ra állítjuk és csökkentett nyomáson 40 C° alatti hőmérsékleten 275 ml halványsárga oldattá betöményítjük, amely 40 mg/ml cefalosporin C vegyületet tartalmaz. Ebből az oldatból 100 ml-t kiveszünk és pH-ját nátriumhidroxiddal 6,5-re állítjuk és 2,1 g cinkacetátot adunk hozzá. A keletkező elegybe 500 ml olyan vizes oldatot csepegtetünk 1,5 óra leforgása alatt, keverés közben, szobahőmérsékleten, amely 4,6 g glioxilsavat és 9,6 ml y-pikolint tartalmaz. A reakció folyamán nátriumhidroxidot adunk a reakcióelegyhez olyan ütemben, hogy a pH-ja 5,0-ös legyen. A reakcióelegy egy részét papírkromatográfiásan megvizsgáljuk. A vizsgálat azt mutatja, hogy az elegy 61% nyers 3-acetoximetil-7ß-(5-karboxi-5-oxopentanoilamido)-3--cefem-4-karbohsavat és 18% 3-acetoximetil-7ß-(4-karboxibutanoilamido)-3-cefem-4-karbonsavat tartalmaz. A reakcióelegyet 30 percig tovább keverjük és utána a pH-ját kénsavval 3,0-ra csökkentjük, ezt követően pedig 60 ml 35%-os vizes hidrogénperoxid-oldatot adunk cseppenként az elegyhez. A reakcióelegyet 15 percig még keverjük és a pH-t a reakció megállítása érdekében kénsavval 1,5-re állítjuk, majd az elegyet megelemezzük és megállapítjuk, hogy 76,1% 3-acetoximetil-7ß-(4%arboxibutanoilamido)-3-cefem-4-karbonsavat tartalmaz. Az elemzésnél 3-acetoximetil-7ß-(5-karboxi-5--oxopentanoilamido)-3-cefem-4-karbonsav nem mutatható ki. Ezt a reakcióelegyet a 2. példában megadott módon kezeljük és így 3,38 g halványsárga kristályos 3-acetoximetil-7ß-(4-karboxibutanoilamido)-3-cefem-4-karbonsavat kapunk. Tisztaság: 78,8%. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
