171083. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-3-(3',4' -dihidroxi-fenil)-2-metil -alanin-peptidek előállítására

171083 11 12 zil-L- 3-( 3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-metilésztert kapunk színtelen por alakjában. 20,90 g (0,04 mól) N-benziloxikarbonil-L-tirozil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-metilésztert az 1. példa I. változata szerinti módon 192 ml 1 n nátriumhidroxid-oldattal 2,5 órán át hidrolizálunk szobahőmérsékleten, majd a reakcióelegyet feldolgozzuk, így 18,20g (89,5%) vékonyrétegkromatográfiásan egységes benziloxikarbonil-L-tirozil-L-3-(3', 4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanint kapunk színtelen por alakjában. A benziloxikarbonücsoport hidrogenolízisét az 1. példa I. változata szerinti módon valósítjuk meg. 1,5 g palládiumoxidot 100 ml metanolban és 20 ml vízben előhidrogénezünk. Ezután hozzáadjuk 15,25 g (0,03 mól) N-benziloxikarbonil-L-tirozil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin 150 ml metanollal és 30 ml vízzel készített oldatát, és 3 órán át hidrogénezzük. A reakcióelegy feldolgozása után 10,4 g (92,5%) színtelen nyers terméket kapunk, amelyet 20 ml vízből átkristályosítunk. Kitermelés: 8,1 g (72,6%) vékonyrétegkromatográfiásan és analitikailag tiszta L-tirozil-L-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin, olvadáspont: 205 C° (bomlás, gyors felmelegítés esetén), [a]o° = + 6,5° (c = 1, metanolban). 10. példa L-[3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanil]L-3-(3,4-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin 13,50 g (0,06 mól) L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-metilésztert és 22,80 g (0,066 mól) N-benziloxikarbonil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanint 300 ml dioxánban 12,36 g (0,06 mól) N,N'-diciklohexilkarbodiimiddel reagáltatunk az 1. példa I. változata szerinti módon és a reakcióelegy feldolgozását is az ott leírt módon végezzük. A termék oszlopkromatográfiás tisztítás után (90 x 5,5 cm méretű oszlop. Kieselgel 60 Merck, futtatószer: kloroform-metanol 10:1) 10,62 g (32,1%) por alakú vékonyrétegkromatográfiásan tiszta N-benziloxikarbonil-L-[ 3-(3 ',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanil]-L-3--(3',4'-dihidroxi--fenil)-2-metil-alanin-metilésztert kapunk. Ennek az észternek 22,10 g-ját (0,04) az 1. példa I. változata szerinti módon 232 ml 1 n nátriumhidroxid-oldattal 3,5 órán át hidrolizáljuk szobahőmérsékleten, majd feldolgozzuk. így 16,5 g (76,7%) vékonyrétegkromatográfiásan egységes N-benziloxikarbonil-L-[3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanil]L-3-(3 ',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanint kapunk (N - benzüoxikarbonil-L-a-metil-dopil-L-a-rnetü-dopa). A benziloxikarbonücsoport hidrogenolízisét az 1. példa I. változata szerint módon végezzük. 1,25 g palládiumoxidot 100 ml metanolban és 30 ml vízben előhidrogénezünk. Ezután hozzáadjuk 13,46 g (0,025 mól) N-benziloxikarbonil-L-[3-(3',4'-dihidroxi- f e n il )-2-metil-alanil]-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin 90 ml metanollal készített oldatát, és a hidrogénezést 3—4 órán át folytatjuk. A reakcióelegy feldolgozása után barnásszínű nyers terméket kapunk, amelyet oszlopkromatográfiásan tisztítunk (90x5,5 cm méretű oszlop, Kieselgel 60 Merck, futtatószer: aceton/víz 8 : 1). A felfogott, vékonyrétegkromatográfiásan tiszta eluátumot vákuumban bepároljuk, 50 ml vízben felvesszük, szénnel kezeljük és vákuumban szárazra pároljuk. így 5,38 g por alakú analitikailag "tiszta L-[3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-5 -áanil]-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanint (L-a-metil-dopil-L-a-metil-dopa) kapunk, amely vákuum-exszikkátorban végzett szárítás után még 2,36 mól vizet tartalmaz, [a]20 = + 34,4° (c = 1, vízben). A kiindulási anyagként alkalmazott N-benziloxi-10 karbonil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanint az alábbi módon állíthatjuk elő. Keverővel, 2 csepegtetőtölcsérrel és 1 gázbevezetőcsővel ellátott 1-literes 3 nyakú lombikba bemérünk 23,8 g L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanint (víz-15 tartalom: 11,8, molekulasúly: 238). A levegő teljes eltávolítása után, amelyet gyenge nitrogén gáz árammal végzünk, csepegtetőtölcséren keresztül 150 ml 2 n nátriumhidroxid-oldatot folyatunk be a lombikba jeges hűtés közben, és az oldatot 0C°-ra 20 hűtjük. 25 perc alatt erős keverés és jeges hűtés közben kis adagokban váltakozva becsepegtetjük 66 ml klórhangyasavbenzilészter 66 ml toluollal készített oldatát és 150 ml 2 n nátriumhidroxid-oldatot. A reakcióelegyet további 30 percen át keverjük, majd 25 6n sósav-oldattal gyengén megsavanyítjuk, és a reakcióterméket 3 x 200 ml éterrel extraháljuk. Az éteres extraktumot 3 x 50 ml 0,5 n sósav-oldattal kirázzuk, és az éteres oldatot nátriumszulfáttal végzett szárítás után vákuumban bepároljuk. Igv 30 59,57 g (97,4%) N-benziloxikarbonil-L-3-(3',4'-di-benzüoxikarboniloxi-fenil)-2-metil-alanint kapunk vékonyrétegkromatográfiásan és analitikailag tiszta, sárgásszínű gyanta alakjában. A két 0,0'-benziloxikarbonücsoport lehasítását az 35 1. példa I. változatában megadott készülékkel és az ott leírt módon végezzük. 12,26 g (0,02 mól) N-benziloxikarbonü-L-3-(3',4'-di-benziloxikarboniloxi-fenil)-2-metil-alanint 550 ml tetrahidrofuránban és 890 ml vízben feloldunk, és 1 órán át hidrolizáljuk 40 szobahőmérsékleten 160ml In nátriumhidroxid-oldattal. Ezután körülbelül 160 ml 1 n sósav-oldattal semlegesítjük, és a tetrahidrofuránt vákuumban teljesen ledesztilláljuk. Körülbelül 40 ml víz hozzáadása után a hidrolízis nyers termékét 100 ml etilacetátban felvesszük, és az 1. példa I. változata szerinti módon feldolgozzuk. így 5.80 g (84,1%) vékonyrétegkromatográfiásan egységes N-benziloxikarbonil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanint kapunk erősen viszkózus sárgásszínű olaj alakjában. 11. példa 55 LAlanü-L-alanu-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil> -2-metil-alanin 11,25 g (0,05 mól) L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-metilésztert és 16,18 g (0,055 mól) benzil-60 oxikarbonil-L-alanil-L-alanint (olvadáspont: 152-153 C°, [a]l° = -34,5° /c = 1, metanolban/) az 1. példa I. változata szerinti módon 250 ml dioxánban 10,3 g (0,05 mól) N,N'-diciklohexilkarbodiimid jelenlétében reagáltatunk, majd kezelünk, ezt köve-65 tőén a reakcióelegyet feldolgozzuk és tisztítjuk az ott 6