171083. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-3-(3',4' -dihidroxi-fenil)-2-metil -alanin-peptidek előállítására
5 171083 6 A benziloxikarbonil-csoport hidrogenolízissel történő eltávolítása céljából 2,5 g palládiumoxidot 130 ml metanolban szobahőmérsékleten és normál nyomáson előhidrogénezünk. Ezután hozzáadjuk 20,12 g (0,05 mól) benzüoxikarbonil-glicil-L-3-(3\ 5 4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin 170 ml metanollal készített oldatát, és szobahőmérsékleten a szokásos módon körülbelül 4 órán át hidrogénezzük hidrogén gáz átvezetése közben a széndioxid lehasadásának befejeződéséig. Ezután a katalizátort ki- 10 szűrjük, és az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, így 13,45 g (100%) színtelen, amorf nyers terméket kapunk, ezt 28 ml vízben felvesszük és 0C°-ra hűtjük. Az oldatból 11,88 g vékonyrétegkromatográfiásán és analitikailag tiszta glicil-L-3- 15 -(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-dihidrát kristályosodik ki, olvadáspont: 187 C°, [aß 0 =-8,0° (c = 1, vízben). II. változat 20 2-literes, keverővel, 2 csepegtetőtölcsérrel, gáz bevezető csővel, pH-elektróddal és hőmérővel ellátott négynyaku lombikban 45 g (0,2 mól) L-3--(3',4'-dihidroxifenil)-2-metil-alanin-metilésztert össze- 25 keverünk 300 ml vízzel és 500 ml kloroformmal, és erős keverés közben 0 C°-ra hűtjük. Ezután egy óra alatt hozzácsepegtetjük 12,34 g (0,11 mól) klóracetilklorid 12 ml kloroformmal készített oldatát. További 45 perc múlva a levegő kiszorítása 30 céljából gyenge nitrogén gáz áramot vezetünk a lombikba, és 0 C° hőmérsékleten, 1,25 óra alatt váltakozva hozzácsepegtetünk 14,8 g (0,13 mól) klóracetilklorid 15 ml kloroformmal és 36,96 g (0,26 mól) nátriumkarbonát 118 ml vízzel készített 35 oldatát (az oldat pH-ja 7,5-8,5). A reakcióelegyet hűtés nélkül 1,5 órán át tovább keverjük. Ezután a reagálatlan metilésztert (20,0 g = 44,4%) kiszűrjük, a kloroformos oldatot elválasztjuk, és bepároljuk. így 33,0 g (54,8%) N-klóracetil-L-3-(3',4'-dihidr- 40 oxi-fenil)-2-metil-alanin-metilésztert kapunk sárgás színű viszkózus olajszerű anyag alakjában. 30,17 g (0,1 mól) metilésztert nitrogén atmoszférában egy órán át hidrolizálunk szobahőmérsékleten 305 ml In nátriumhidroxid-oldatban, 4 5 majd körülbelül 77 ml 4 n sósav-oldattal semlegesítjük, és a kivált olajszerű anyagot 2x150 ml etilacetáttal extraháljuk. A nátriumszulfáttal szárított extraktumot vákuumban bepároljuk. így 26,1 g (91,0%) N-klóracetü-L-3-(3,4-dihidroxi-fenil)- 50 -2-metil-alanint kapunk, sárgásszínű olajszerű anyag alakjában. 28,7 g (0,1 mól) N-klóracetil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-t nitrogén atmoszférában 260 ml tömény ammóniában feloldunk, és 5 napon 55 át szobahőmérsékleten reagáltatjuk. Ezután vákuumban bepároljuk, és a nyersterméket oszlopkromatográfia segítségével tisztítjuk (60 x 6,4 cm méretű Kieselgel 60 oszlop, gyártja Merck, futtatószer: n-butanol-jégecet-víz 2:1:1). A vé- 60 konyrétegkromatográfiásan tiszta eluátumból vákuumban végzett bepárlás és 35 ml vízből végzett átkristályosítás után 22,8 g (75,0%) glicil-L-3-(3',4',' -dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-dihidrátot kapunk, amelynek olvadáspontja: 186-187 C°. 65 2. példa LAlanÜ-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin 11,25 g (0,05 mól) L-3-(3',4'-dihidroxi-feml)-2--metil-alanin-metilésztert és 13,38 g (0,06 mól) benziloxikarbonil-L-alanint (olvadáspont: 84-86 C°, [a]D =-15,6°/c = 2, ecetsavban/) az 1. példa I. változata szerinti módon 10,3 g (0,05 mól) N,N'-diciklohexilkarbodiimiddel reagáltatunk és a reakcióelegy feldolgozását is az ott leírt módon végezzük, így 21,5 g (100%) színtelen nyers terméket kapunk, ebből oszlopkromatográfiás tisztítással 16,51 g (76,9%) tiszta benziloxikarbonil-L-alanil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-metilésztert állítunk elő. 10,75 g (0,025 mól) benziloxikarbonil-L-alanil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-metilésztert az 1. példa I. változata szerinti módon 95 ml In nátriumhidroxid-oldattal 50 percen át hidrolizálunk szobahőmérsékleten, és a reakcióelegy feldolgozását is az ott leírt módon végezzük. így 9,46 g (91,0%) vékonyrétegkromatográfiásan egységes benziloxikarbonil-L-alanil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanint,kapunk színtelen habszerű anyag alakjában. 20,8 g (0,05 mól) benziloxikarbonil-L-alanil-L-3--(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanint a benziloxikarbonilcsoport hidrogenolízise céljából 1,5 órán át hidrogénezünk szobahőmérsékleten az 1. példa I. változata szerinti módon, és a reakcióelegy feldolgozását is az ott leírt módon végezzük. így 13,38 g (94,7%) nyers terméket kapunk, ezt 13,5 ml vízből átkristályosítva 11,7 g analitikailag tiszta L-alanil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-trihidrátot kapunk, olvadáspont: 82-87 C° (leforrasztott csőben), [a]l° =-26,9° (c= 1, vízben). 3. példa D-Alanil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin 15,75 g (0,07 mól) L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2--metil-alanin-metilésztert és 16,83 g (0,075 mól) benzüoxikarbonil-D-alanint (olvadáspont: 84— 86 C° [áfa0 = + 14,8° /c = 2, ecetsavban/) 350 ml dioxánban 14,4 g (0,07 mól) N,N'-diciklohexilkarbodiimiddel reagáltatunk az 1. példa I. változata szerinti módon és a reakcióelegy feldolgozását is az ott leírt módon végezzük. így 30,1 g (100%) színtelen nyers terméket kapunk. Oszlopkromatográfiás tisztítás után 29,1 g (96,6%) vékonyrétegkromatográfiás tiszta benziloxikarbonil-D-alanil-L-S-^'^'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-meíilésztert "kapunk színtelen por alakjában. 10,75 g (0,025 mól) benziloxikarbonil-D-alanil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-metilésztert 2 órán át hidrolizálunk szobahőmérsékleten 95 ml 1 n nátriumhidroxid-oldattal az 1. példa I. változata szerinti módon, és a reakcióelegy feldolgozását is az ott leírt módon végezzük. így 9,46 g (91,0%) 3
