170786. lajstromszámú szabadalom • Eljárás MM-13902 antibiotikum-sók előállítására

25 170786 22 -fruktózt és a ramnózt hasznosítja, i-inoziton és raffinózon azonban egyáltalán nem, vagy csak alig növekedik. A szacharóz-hasznosításra vonatkozó kísérletek eredményei nem egyértelműek. A Streptomyces olivaceus-nak vagy Streptomyces fulvoviridisnek nevezett, illetve az analóg törzseket az I. S. P. által ajánlott standard módszerekkel vizsgáltuk (Shirling és munkatársai: Int. J. Syst. Bacteriol. 16, 313—340 [1966]). A vizsgálatokhoz felhasznált törzsek közül az ATCC 21379, ATCC 21380, ATCC 21381 és ATCC 21382 törzset — MM 4550 jelű komplex terméket termelő képességük alapján — talajból izoláltuk, míg a további törzseket törzsgyűjteményekből szereztük be az összehasonlító vizsgálatok céljára. Az MM 4550 jelű komplex termék termelésére vonatkozó kísérletek eredményeit az 5. táblázatban közöljük. A 6—9. táblázatban a vizsgált törzsek légmicélíumainak színét, sporofóráinak alakját, a szubsztrát-micéliumok színét, a törzsek oldható pigment-termelését, valamint a törzsek melanin-termelését és szénforrás-hasznosítását közöljük. Az elektronmikroszkópos vizsgálatok szerint valamennyi felhasznált törzs sima felületű spórákkal rendelkezik. Az I. S. P. vizsgálatok alapján nyilvánvaló, hogy a Streptomyces olivaceus sporofóráinak spirális alakja variábilis jellemző. Az ATCC 3335 letéti számú Streptomyces olivaceus törzs esetén változó gyakorisággal észleltünk valódi spirálokat; e törzs sporofórái általában hosszúak voltak. Az ATCC 21379, ATCC 21380, ATCC 21381 és ATCC 21382 törzsek esetén valódi spirálokat nem észleltünk, a sporofórák azonban ebben az esetben is hosszúak voltak, és alakjuk a spirális és rektiflexibilis alak közötti átmenetnek volt tekinthető. Az NCIB 8238 és NCIB 8509 letéti számú Streptomyces olivaceus törzs esetén a sporofórák többsége rektiflexibilis volt. Az NCIB 8238 törzs sporofórái közepes méretűek, míg az NCIB 8509 törzs sporofórái hosszúak voltak. Az ATCC 15863 letéti számú Streptomyces fulvoviridis törzs sporofórái kizárólag rektiflexibilis alakúak, és rövidebbek az ATCC 21379, ATCC 21380, ATCC 21381, ATCC 21382 és ATCC 31126 törzsek sporofóráinál. E tények figyelembevételével az ATCC 21379, ATCC 21380, ATCC 21381, ATCC 21382 és ATCC 31126 törzsek Streptomyces olivaceus-törzseknek tekinthetők. Az inozit-hasznosítás tekintetében (amely a Streptomyces olivaceus és Streptomyces fulvoviridis törzseket egymástól megkülönböztető jellemző) az ATCC 21379, ATCC 21380, ATCC 21381, ATCC 21382 és ATCC 31126 törzsek viselkedése eltér egymástól. Az ATCC 31126 és az ATCC 21380 törzs — a Streptomyces olivaceus-törzshöz hasonlóan — hasznosítja az inozitot, míg a további három törzs inozit-hasznosítása kétséges, illetve inoziton egyáltalán nem növekedik. Meg kell azonban jegyeznünk, hogy egy adott szénforrás hasznosításában mutatkozó különbségek még nem elegendőek ahhoz, hogy a törzsek azonosságát kizárjuk, mert ez az eltérés egyszerű genetikus mutáció eredménye is lehet. Az NCIB 8138, NCIB 8509, ATCC 21549, ATCC 12019 és ATCC 3335 törzsek cukorhasznosítása között észlelhető különbségeket általában nem tekintik a faji hovatartozást eldöntő jellemzőnek. Mindezek figyelembevételével megállapíthatjuk, hogy az ATCC 21379, ATCC 21380, ATCC 21381, ATCC 21382 és ATCC 31126 törzset a Streptomyces olivaceus fajhoz tartozó törzseknek tekinthetjük. 5 Meg kívánjuk még jegyezni, hogy — amennyiben a későbbi kutatások során a jelenleg Streptomyces olivaceus-nak és Streptomyces fulvoviridisnek nevezett törzsek között további, az eddig felismerteknél lényegesebb különbségeket nem fedeznek fel, ezt a két törzset nem-10 zetközileg valószínűleg azonos törzsnek fogják tekinteni. Ebben az esetben valószínűleg a Streptomyces fulvoviridis törzset is Streptomyces olivaceusnak fogják nevezni a prioritási elv alapján. 15 A Streptomyces olivaceus és a rokontörzsek fermentációja során képződött, MM 4550 jelű komplex terméket a következőképpen mutatjuk ki: A törzsek szűrt fermentlevének mintáit Whatman 20 No. 1 szűrőpapír-csíkra cseppentjük (minden csepp térfogata 20 [ú), majd a rendszert éjszakán át, hűtött térben?: 7: 6 térfogatarányú n-butanol: izopropanol: vízeleggyel futtatjuk. Egy másik kísérletben egyébként azonos körülmények között futtatószerként 12: 3:5 ará-25 nyú n-butanol: jégecet: vízelegyet használunk. A kromatogramokat a kereskedelemben kapható, tisztított MM 4550 jelű komplex termék azonos módon készített kromatogramjaival hasonlítjuk össze. [30 Az MM 4550 jelű komplex terméket a következőképpen is kimutathatjuk: 25 ml szűrt fermentlevet 12,5 ml 0,2%-os diklórmetános cetil-dimetil-benzil-ammóniumklorid oldattal extrahálunk, a fázisokat elválasztjuk egymástól, és a szerves fázishoz 2,5 ml 0,5%-os 35 vizes nátriumjodid-oldatot adunk. A kétfázisú rendszert összerázzuk, a fázisokat elválasztjuk egymástól, majd a vizes fázis 5 \ú térfogatú mintáját vékonyréteg-kromatográfiásán vizsgáljuk. Futtatószerként 7:7:6 arányú n-butanol: izopropanol: vízelegyet használunk fel. 40 5. táblázat Streptomyces-törzsek MM 4550 jelű komplex terméket termelő képessége Mikroorganizmus Termelőképesség Streptomyces olivaceus ATCC 21379 + Streptomyces olivaceus ATCC 31126 + Streptomyces olivaceus ATCC 21380 + Streptomyces olivaceus ATCC 21381 + Streptomyces olivaceus ATCC 21382 + Streptomyces olivaceus NCIB 8238 + Streptomyces olivaceus NCIB 8509 + Streptomyces olivaceus ATCC 21549 — Streptomyces olivaceus ATCC 12019 — Streptomyces olivaceus ATCC 3335 — Streptomyces flavovirens ATCC 3320 + Streptomyces flavus ATCC 3369 + Streptomyces fulvoviridis ATCC 15863 (RIA 660) + Streptomyces argenteolus ATCC 11009 + Streptomyces sioyaensis ATCC 13989 + Streptomyces lipmanii NRRL 3584 + 11