170725. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-L- aszparagil- L-fenilalanin alkilészterek előállítására

5 170725 6 a-L-aszparagil-L-fenilalanint, amelyet azután szilárd/folyadék-elválasztási műveletekkel elkülönítünk. A visszamaradó oldatot ezután kezeljük, így például desztillációnak vetjük alá annak érdekében, hogy a nem reagált alkanolt visszanyerjük. A megmaradó reakcióelegyet 5 ezután a kívánt reakciótermék elkülönítésére tovább kezelhetjük. A reakcióelegyet például sósavas oldattal kezeljük avégett, hogy az oc-L-aszparagil-L-fenilalanin-alkilésztert hidroklorid sóként csapadék alakjában kinyerjük. A hidroklorid-sóból ezután a kívánt terméket 10 felszabadíthatjuk. Meglepő módon azt találtuk, hogy az cc-L-aszparagil-L-fenilalanin-alkilészterek hidroklorid-sója jóval oldhatatlanabb, mint az egyéb előbb említett vegyületek és 15 ennek következtében szilárd/folyadék-elkülönítési módszerrel ilyen formában könnyen kinyerhetők. Fontos ennél a módszernél az, hogy az összes többi vegyület az anyalúgban marad és könnyen a-L-aszparagil-L-fenilalaninná hidrolizálhatók, ez pedig kinyerhető és/vagy visz- 20 szakeringtethető az észterezési reakcióba. A következő példák a találmány részleteiben való bemutatására szolgálnak, a találmány oltalmi köre azonban nem korlátozódik csupán a példákra. 25 A példákban alkalmazott vékonyrétegkromatográfía anyagai és módszerei a következők: [A vékonyrétegkromatográfiát angol nevének kezdőbetűi után TLC-nek (thin layer chromatography) rövidítjük.] 30 A) Lemez — Silica Gel F üveglemezre felvive, Brinkmän Instrument Inc., Westbury, N. Y. 11590 készítménye. 35 B) Oldószer-rendszer 1. kloroform metanol ecetsav desztillált víz 2. n-propanol desztillált víz metanol hangyasav C) Előhívó oldatok — 64% (tf.%) 30% (tf.%) 2% (tf.%) 4% (tf.%) 70% (tf.%) 10% (tf.%) 10% (tf.%) 10% (tf.%) 40 45 1. 0,3 g ninhidrin 100 ml n-butanol és 3 ml jégecet 50 elegyében oldva. 2. 1 g káliumjodid és 1 g oldható keményítő 100 ml desztillált vízben oldva. D) Módszerek — 55 Futtatás és a megfelelő oldószer-rendszerben való előhívás után a lemez levegőn való szárítása 30 percig. Ninhidrin-permet — A lapot permetezzük és utána 60 15 percig 100 C°-on tartjuk. Keményítő-jodid-permet — A lemezt terc.butilhipoklorit-gőzzel telített szekrénybe tesszük 15 percre, 30 percig levegőn szárítjuk, utána frissen készített keményítő-jodid-oldattal bepermetezzük. 65 1. példa N-formil-oc-L-aszparagil-L-fenilalanin Megfelelő reakcióedényben 45—50 C°-on 34,6 g (0,21 mól) L-fenilalanint adunk 45 perc leforgása alatt 30 g (0,21 mól) N-formil-L-aszparaginsavanhidrid és 300 g jégecet elegyéhez. A keletkező elegyet további 30 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk, utána pedig 25C°ra hűtjük. A kivált kristályos terméket szűréssel elkülönítjük és 50 g jégecettel mossuk. Ily módon 40,5 g N-formil-a-L-aszparagil-L-fenilalanint kapunk, amelynek az olvadáspontja 180—182 C°. Vékonyrétegkromatográfiás elemzéssel nem mutatható ki ß-alaku szennyeződés a termékben. 2. példa Egy megfelelő reakcióedényben 288 g (2,82 mól) ecetsavanhidridet körülbelül 45 perc leforgása alatt 25 C°-on hozzáadunk 428 g 97%-os hangyasavhoz, és az elegyet további 45 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk. Ezt követően 147 g (1,1 mól) L-aszparaginsavat viszünk be a reakcióedénybe. A keletkező oldatot körülbelül 3,5 óra hosszat 25 C°-on keverjük és frakcionált desztillációval bizonyos feleslegben levő hangyasavat eltávolítunk. Ezután annyi jégecetet adunk az elegyhez, hogy a jelenlevő ecetsav összesen 972 g legyen, majd 45 perc leforgása alatt 174 g (1,05 mól) L-fenilalanint juttatunk be az elegybe 50 C°-on egy adagolócsiga segítségével. A kapott masszát 30 percig 50 C°-on tartjuk, utána hagyjuk 25 C°-ra lehűlni. A kristályos N-formil-a-L-aszparagil-L-fenilalanint centrifugálással elkülönítjük, és 200 ml jégecettel mossuk. A termék végső száraz súlya 178 g és olvadáspontja 182—184 C°. Vékonyrétegkromatográfiás elemzés lényegében tiszta N-formil-a-L-aszparagil-L-fenilalanint mutat ß-alaku termék jelenléte nem mutatható ki. 3. példa oc-L-aszparagil-L-fenilalanin 100 g (0,322 mól) N-formil-a-L-aszparagil-L-fenilalanin és 59,7 g (0,607 mól) 37%-os sósav elegyét 392 ml vízben 60 C°-on 4—5 óra hosszat melegítjük. A keletkező oldatot 32,6 g (0,41 mól) 50%-os nátriumhidroxidoldattal részlegesen semlegesítjük, utána pedig 20—25 C°-ra lehűtjük. A képződött szilárd terméket összegyűjtjük és 50 ml hideg vízzel (5 C°) mossuk. Az ily módon kapott oe-L-aszparagil-L-fenilalanin mennyisége 32,7 g. Az előző lépésekből származó anyalúgot és a mosóvizet egyesítjük és 60 C°-on 17,6 g (0,22 mól) 50%-os nátriumhidroxid-oldattal semlegesítjük. Ezután a reakciómasszát 25 C°-ra hűtjük, a szilárd csapadékot elkülönítjük és 50 ml hideg vízzel mossuk. Ily módon további 45 g a-L-aszparagil-L-fenilalanint kapunk. A teljes «-L-aszparagil-L-fenilalanin kitermelés 77,7 g. [oc&° + 30,2°, C =0,7, 75%-os vizes ecetsav. 3