170670. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptid-peptidohidroláz-típúsú proteolitikus enzimek mennyiségének meghatározására, és eljárás a reagensek előállítására
15 170670 16 tográfiásan (futtatószer: P! elegy) egységes. [ajf 5 = = — 33,5° (c = 1,0, metanolban). b) lépés: Cbo-Phe-Leu-Arg(N02)-pNA (Xllb) Kiindulási anyagként 3,6 g (6,5 mmól) (Xlla) képletű vegyületet és 3,27 g (7,8 mmól) Cbo-Phe-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 2,95 g (69,0%) amorf (Xllb) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásán (futtatószer: Px elegy) egységes. MD = —6,2° (c —1,0, dimetilformamidban). c) lépés: H-Phe-Leu-Arg-pNA.2HCl (XII) Kiindulási anyagként 124,9 mg (0,17 mmól) (Xllb) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 50%-os ecetsavban, Sephadex G—25 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 65 mg (61%) amorf, 11,15% klórtartalmú (XII) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes, [a]" = —24,4° (c=0,63, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés: Leu: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,0. 13. példa N«-Bz-Phe-Leu-Arg-pNA.HCl (XIII) a) lépés: N*-Bz-Phe-Leu-Arg(N02)-pNA (XHIa) Kiindulási anyagként 734 mg (1 mmól) (Xllb) képletű vegyületet és 272 mg (1,2 mmól) Bz20-t használunk. A reakciót az 1. példa d) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 589 mg (84%) (XHIa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: P, elegy) egységes. MD = —19,1° (c = 1,01, dimetilformamidban), op.: 196—197 °C. b) lépés: Na -Bz-Phe-Leu-Arg-pNA.HCl (XIII) Kiindulási anyagként 198,5 mg (0,282 mmól) (XHIa) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 50%-os ecetsavban, Sephadex G—-25 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 188 mg (96%) amorf, 4,96% klórtartalmú (XIII) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. [«.]£ = -38,3° (c=0,69, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Leu: 1,0; Phe: 1,0; Arg: 1,0. 14. példa H-Phe-Ile-Arg-pNA.2HCl (XIV) a) lépés: Cbo-Ile-Arg(N02)-pNA (XlVa) Kiindulási anyagként 1 g (2,1 mmól) (la) képletű vegyületet és 0,98 g (2,46 mmól) Cbo-Ile-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 1,12 g (91%) (XÍVa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: P! elegy) egységes. Op.: 195—202 °C; [a]o = +2,8° (c = l,0, dimetilformamidban). 5 b) lépés: Cbo-Phe-Ile-Arg(N02)-pNA (XlVb) Kiindulási anyagként 0,8 g (1,36 mmól) (XlVa) képletű vegyületet és 0,69 g (1,63 mmól) Cbo-Phe-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt !0 módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 445 mg (41%) (XlVb) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: P! elegy) egységes. Op.: 219— 222 °C; [a&5 = -7,1° (c = 1, dimetilformamidban). 15 c) lépés: H-Phe-Ile-Arg-pNA.HCl (XIV) Kiindulási anyagként 166,43 mg (0,226 mmól) (XlVb) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1.' példa 20 g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 50%-os ecetsavban, Sephadex G—25 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 95,3 mg (67%) amorf, 11,17% klórtartalmú (XIV) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A 25 elegy) egységes. [a]D3 =32,0° (c=0,63, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: lie: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,0. ,„ 15. példa N*-Bz-Phe-Ile-Arg-pNA.HCl (XV) a) lépés: N a-Bz-Phe-Ile-Arg(N0 2 )-pNA (XVa) Kiindulási anyagként 250 mg (0,34 mmól) (XlVb) kép-35 létű vegyületet és 92 mg (0,4 mmól) Bz2 0-t használunk. A reakciót az 1. példa d) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 210 mg (88%) (XVa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtató-40 szer: ?x elegy) egységes. Op.: 244—245 °C; [aß 5 = — 22,3° (c = 1, dimetilformamidban). b) lépés: N*-Bz-Phe-Ile-Arg-pNA.HCl (XV) 45 Kiindulási anyagként 182,7 mg (0,26 mmól) (XVa) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 50%-os ecetsavban, Sephadex G—25 oszlopon szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 176,9 mg (97%) 50 amorf, 4,98% klórtartalmú (XV) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. [OC]D = — 41,5° (c =0,69, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: lie: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,1. 55 16. példa H-Phe-Phe-Arg-pNA.2HCl (XVI) 60 a) lépés: Cbo-Phe-Arg(N02 )-pNA (XVIa) Kiindulási anyagként 1 g (2,1 mmól) (la) képletű vegyületet és 1,06 g (2,46 mmól) Cbo-Phe-OpNP-t hasz-65 nálunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon 8
