170670. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptid-peptidohidroláz-típúsú proteolitikus enzimek mennyiségének meghatározására, és eljárás a reagensek előállítására

23 170670 24 A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 353 mg (81%) amorf (XXVIIIa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj) egységes. b) lépés: N"-Bz-DL-C-Ph.Gly-Val-Arg(N02)-pNA (XXVIIIb) Kiindulási anyagként 285 mg (0,403 mmól) (XXVIIIa) képletű vegyületet és 181 mg (0,8 mmól) Bz2

0-t használunk. A reakciót az 1. példa d) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 226 mg (83%) amorf (XXVIIIb) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. c) lépés: N"-Bz-DL-C-Ph.Gly-Val-Arg-pNA.HCl (XXVIII) Kiindulási anyagként 101 mg (0,15 mmól) (XXVIIIb) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 33%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 61 mg (61%) amorf, 5,21% klórtartalmú (XXVIII) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; C.-Ph.Gly: 1,2; Arg: 0,9. 29. példa Na

-Bz-Phe-Val-Arg-2-NA

. HCl (XXIX) a) lépés: Cbo-ArgíNO^-NA (XXIXa) Kiindulási anyagként 3,6 g (10 mmól) Cbo-Arg-(N02)-OH-t és 1,72 g (12 mmól) 2-naftilamint használunk fel. A reakciót az 1. példa a-2) lépése szerint végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 4,05 g (84%) amorf (XXIXa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pt elegy) egységes, [a]" = +7,4° (c = 1,0, dimetilformamidban). b) lépés: Cbo-Val-Arg(N02

)-2-NA (XXIXb) Kiindulási anyagként 1,5 g (3,1 mmól) (XXIXa) képletű vegyületet és 1,38 g (3,7 mmól) Cbo-Val-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépése szerint végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 1,66 g (95%) részben kristály [XXIXb) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes [x]g = -6,0° (c = l,01, dimetilformamidban). c) lépés: Cbo-Phe-Val-Arg(N02)-2-NA (XXIXc) Kiindulási anyagként 1,65 g (2,84 mmól) (XXIXb) képletű vegyületet és 1,43 g (3,4 mmól) Cbo-Phe-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa c) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 1,55 g (75%) amorf (XXIXc) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. [a]22 = -10,9° (c = 1,01, dimetilformamidban). d) lépés: N0t

-Bz-Phe-Val-Arg(NO

2

)-2-NA (XXIXd) Kiindulási anyagként 1,15 g (1,58 mmól) (XXIXc) képletű vegyületet és 465 mg (2,05 mmól) Bz2

0-t hasz-5 nálunk. A reakciót az 1. példa d) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 0,89 g (80,3%) részben kristályos (XXIXd) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. 10 [a

]2o = _ 314° (

c

- 1,01, dimetilformamidban). e) lépés: N°<-Bz-Phe-Val-Arg-2-NA. HCl (XXIX) Kiindulási anyagként 620 mg (0,89 mmól) (XXIXd) !5 képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 50%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. A szűrletet fagyasztva szárítjuk. 385 mg (63%) amorf, 5,12% klórtartalmú (XXIX) képletű vegyületet kapunk, 20 amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes, [a]22 = -53,8° (c =

0,71, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,0. 30. példa N<"-Bz-Phe-Val-Arg-l-N02

-2-NA. HCl (XXX) 30 a) lépés: Cbo-Arg(N02

)-l-N0

2

-2-NA (XXXa) Kiindulási anyagként 3,6 g (10 mmól) Cbo-Arg(N02

)-OH-t és 2,26 g (12 mmól) l-nitro-2-naftilamint használunk. A reakciót az 1. példa a-2) lépése szerint végezzük. 35 A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 3,85 g (73,1%) amorf (XXXa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. [a]J,9 = —11,8° (c = l,0, dimetilformamidban). b) lépés: Cbo-Val-Arg(N02

)-l-N0

2

-2-NA (XXXb) Kiindulási anyagként 950 mg (1,8 mmól) (XXXa) kép-45 létű vegyületet és 825 mg (2,2 mmól) Cbo-Val-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 0,9 g (80%) részben kristályos (XXXb) képletű vegyületet kapunk, amely 50 vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes, [a]2,

2

= + 1,05° (c = l,0, dimetilformamidban). 55 c) lépés: Cbo-Phe-Val-ArgíNO^-l-NO^-NA (XXXc) Kiindulási anyagként 800 mg (1,27 mmól) (XXXb) képletű vegyületet és 640 mg (1,52 mmól) Cbo-Phe-60 -OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa c) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 785 mg (79,9%) amorf (XXXc) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egy-65 séges. [a]2

,

2

= - 7,0° (c = 1,02, dimetilformamidban). 12