170669. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptid-peptidohidroláz-típusú proteolitikus enzimek mennyiségének meghatározására, és eljárás a reagensek előállítására
15 170669 16 amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pls illetve C elegy) egységes. M" = +7,35° (c = l,0, dimetilformamidban). b) lépés: Cbo-Leu-Arg(N02)-2-NA (XlVb) Kiindulási anyagként 1,5 g (3,1 mmól) (XlVa) képletű vegyületet és 1,43 g (3,7 mmól) Cbo-Leu-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 1,6 g (86%) amorf (XlVb) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. [«]§> = -9,1° (c = 1,0, dimetilformamidban). c) lépés: Cbo-Leu-Leu-Arg(N02 )-2-NA (XIVc) Kiindulási anyagként 1,35 g (2,26 mmól) (XlVb) képletű vegyületet és 1,05 g (2,71 mmól) Cbo-Leu-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 1,00 g (62,4%) részben kristályos (XIVc) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pt elegy) egységes. [a]£ = -20,6° (c = 1,0, dimetilformamidban). d) lépés: N-Bz-Leu-Leu-Arg(N02 )-2-NA (XIVd) Kiindulási anyagként 990 mg (1,4 mmól) (XIVc) képletű vegyületet és 407 mg (1,8 mmól) Bz20-t használunk. A reakciót a 2. példa a) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 800 mg (84%) amorf (XlVd) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes, [a]ß = = — 13,4° (c = 1,0, dimetilformamidban). e) lépés: N-Bz-Leu-Leu-Arg-2-NA.HCl (XIV) Kiindulási anyagként 350 mg (0,52 mmól) (XlVd) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példában leírt módon végezzük. A nyers terméket 33%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. A szűrletet fagyasztva szárítjuk. 260 mg (75%) amorf, 5,30% klórtartalmú (XIV) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. [a ]g> = - 51,8° (c = 0,57, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Leu: 2,0; Arg: 0,95. 15. példa N-Bz-Leu-Leu-Arg-l-NÖ2-2-NA . HCl (XV) a) lépés: Cbo-Arg(N02)-l-N0 2 -2-NA (XVa) Kiindulási anyagként 3,6 g (10 mmól) Cbo-Arg(N02)-OH-t és 2,26 g (12 mmól) l-nitro-2-naftilamint használunk. A reakciót a 14. példa a) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 3,1 g (58,7%) amorf (XVa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj, illetve C elegy) egységes, [ág = -11,8° (c = 1,0, dimetilformamidban). b) lépés: Cbo-Leu-Arg(N02 )-l-N02)-2-NA(XVb) Kiindulási anyagként 950 mg (1,8 mmól) (XVa) képletű vegyületet és 850 mg (2,2 mmól) Cbo-Leu-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 900 mg (78%) amorf (XVb) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. [«]22 = 5 = -10,2° (c = l,02, dimetilformamidban). c) lépés: Cbo-Leu-Leu-Arg(N02 )-l-N0 2 -2-NA (XVc) Kiindulási anyagként 900 mg (1,4 mmól) (XVb) képletű vegyületet és 650 mg (1,7 mmól) Cbo-Leu-OpNP-t 10 használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH-20 gélen szűrjük. 810 mg (77%) amorf (XVc) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes, [a]^ = 15 = - 18,2° (c = 1,01, dimetilformamidban). d) lépés: N-Bz-Leu-Leu-Arg(N02 )-l-N0 2 -2-NA (XVd) Kiindulási anyagként 680 mg (0,88 mmól) (XVc) kép-20 létű vegyületet és 260 mg (1,15 mmól) Bz2 0-t használunk. A reakciót a 2. példa a) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 480 mg (73%) amorf (XVd) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatog-25 ráfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. [<X]Q = — 31,4° (c = 0,9, dimetilformamidban). e) lépés: N-Bz-Leu-Leu-Arg-l-N02 -2-NA.HCl (XV) 30 Kiindulási anyagként 74 mg (0,1 mmól) (XVd) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példában leírt módon végezzük. A nyers terméket 33%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 47 mg (66%) amorf, 4,94% klór-3 5 tartalmú (XV) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes, [ag? = - 33,6° (c = 0,72, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Leu: 2,0; Arg: 0,9. 16. példa N-Bz-Leu-Leu-Arg-4-N02 -l-NA.HCl(XVI) 45 a) lépés: Cbo-Arg(N02 )-4-N0 2 -l-NA (XVIa) Kiindulási anyagként 3,6 g (10 mmól) Cbo-Arg(N02 )-OH-t és 2,26 g (12 mmól) 4-nitro-l-naftilamint használunk. A reakciót a 14. példa a) lépésében leírt módon 50 végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 2,9 g (55%) amorf (XVIa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj, illetve C elegy) egységes. MD = = —11,4° (c = l,01, dimetilformamidban). b) lépés: Cbo-Leu-Arg(N02 )-4-N0 2 -l-NA (XVIb) Kiindulási anyagként 650 mg (1,23 mmól) (XVIa) képletű vegyületet és 560 mg (1,45 mmól) Cbo-Leu-60 -OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 520 mg (66%) amorf (XVIb) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásán (futtatószer: Pj elegy)egységes. MD= 65 = — 11,8° (c = 0,2, dimetilformamidban). 8
