170665. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminocukor származékok tiszta állapotban való elkülönítésére keverékeikből
7 170665 8 kuumban történő eltávolítása után — az oldat bepárlása után liofilizálással vagy szerves oldószerekkel való lecsapolással, előnyösen 10—20 térfogatrész acetonnal történő lecsapással nyerhetjük ki. Ezen túlmenően a kismolekulájú, semleges szacharidokból származó, gátló hatású aminocukor-származékokat cellulóz-alakú ioncserélőkön, előnyösen foszfocellulózon (gyártja Serva, Heidelberg) végzett kromatografálással választhatjuk el. Ekkor futtatószerként valamely kis ionerősségű, előnyösen 2—100 mM, különösen 5—10 mM ionerősségű puffert, előnyösen foszfátpuffért használunk 2,5—8, előnyösen 5—6 pH-tartományban. A hatásos frakcionálás feltétele, hogy a frakcionálandó készítmények sótartalma lehetőleg alacsony legyen, míg a színezőanyagok kevésbé zavarnak. Annak érdekében, hogy a gátló hatású aminocukorszármazékok találmány szerinti eljárással előállítható homológ sorából az egyes tagokat tisztán állítsuk elő, az előtisztított készítményeket alkalmas molekulaszitán át kromatografáljuk, például a Bio-Gel P—2 jelzésű molekulaszitán (gyártja Bio-Rad, München), és az eluátum frakcióit vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáljuk. Az aminocukor-származékokat tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, újra kromatografáljuk, végül bepárlás után liofilizáljuk vagy szerves oldószerek segítségével, amint a fentiekben leírtuk, kicsapjuk. Miként említettük, az I általános képletű vegyületek homológ sort alkotnak. A homológ sorban a magasabb tagok az alapvegyülettől csak abban térnek el, hogy mindig még egy további hexóz-, előnyösen glükózegységet tartalmaznak. Az ilyen homológ sorok tagjait továbbá az jellemzi, hogy savas totálhidrolízis esetén a III képletű „I. komponens"-! (C13H 19 0,N), valamint a megfelelő monoszacharidot szolgáltatják. A homológ sor alapjául szolgáló vegyület az, amelyben nx +n 2 értéke 1. E vegyületet „II. komponens"-nek neveztük el, és ez a II képlettel jellemezhető. Magmágneses rezonanciaspektroszkópiai vizsgálatának tanúsága szerint a vegyület szerkezete közelebbről a Ha képletnek felel meg, így a vegyület szabatosan 0-{4,6--bisz-dezoxi-4-[l S-(1,4,6/5)-4,5,6-trihidroxi-3 -hidroximetil-ciklohex-2-én-il-amino]-a-D-glükopiranozil}-(l -» 4) -D-glükopiranóznak nevezhető. A sorozat minden egyes tagja abban tér el a hozzá legközelebb álló alacsonyabb, illetve magasabb tagtól, hogy még egy, illetve eggyel kevesebb glükózegységet tartalmaz. így a „II. komponens"-hez hasonlítva egy glükózegységgel nagyobb vegyület, tehát a „II. komponens"nek nevezett, IV képletű vegyület, amely spektroszkópiai vizsgálatainak tanúsága szerint közelebbről a IVa képlettel jellemezhető, szabatosan 0-{4,6 -bisz -dezoxi -4 --[1 S-(l,4,6/5)-4,5,6-trihidroxi-3-hidroximetil-ciklohex-2--én-l-il-amino]-a-D-glükopiranozil}-(l->-4)-0-a-D-glükopiranozil-(l ->- 4)-D-glükopiranóznak nevezhető. A homológ sor következő tagja (amelyben nj + n2 = = 3) a kétféle izomer (Va vagy Vb képlettel jellemezhető izomer) formájában képződő IV. komponens, amelynek előállítása esetében a kétféle izomer egyike képződik túlnyomó mennyiségben. Részleges savas hidrolízis során mindkét izomer 1: 2 mólarányban a II képletű vegyületre, azaz a II. komponensre és glükózra bomlik. A kisebb mennyiségekben előforduló Va képletű izomer közelebbről az Va' térbeli szerkezetet is tükröző képlettel jellemezhető, illetve szabatosan 0-{4,6--bisz -dezoxi -4 -[1 S -(1,4,6/5) -4,5,6 -trihidroxi -3 -hidroximetil -ciklohex -2 -én -1 -il -amino] -a -D -glükopiranozil} --(1 -<- 4) -O -a -D -glükopiranozil -(1 ->- 4) -O -a -D -glükopiranozil-(l-*-4)-D-glükopiranóznak nevezhető. 5 A nagyobb mennyiségekben előforduló Vb képletű izomer közelebbről az Vb' képlettel jellemezhető, illetve szabatosan 0-{4,6-bisz-dezoxi-4-[l S-(l,4,6/5)-4,5,6--trihidroxi-3-hidroximetil-4-0-a-D-glükopiranozil-(l-»-4)-ciklohex-2-én-l-il-amino]-a-D-glükopiranozil}-(l—4)-0-10 -a-D-glükopiranozil-(1-^4)-D-glükopiranóznak nevezhető. Az Vb' képlettel jellemzett szerkezetű izomer létezését úgy bizonyíthatjuk, hogy aktívszénre felvitt palládium mint katalizátor jelenlétében végzett hidrogénező 15 lebontás termékeit elemzésnek vetjük alá. Az elemzés során az alábbi bomlástermékek mutathatók ki: 3-hidroximetil-4,5,6-trihidroxi-4-0-oc-D-glükopiranozil -(l)-hexán, 0-(4-amino-4,6-bisz-dezoxi-a-D-glükopiranozil)-( 1 -* 4)-0-a-D-glükopiranozil-(l -*• 4)-D-glükopira-20 nóz és glükóz (lásd az A reakcióvázlatot). Tekintettel arra, hogy a hidrogénezés során a hexéncsoport kettőskötése redukálódik és az aminokötés felhasad, nyilvánvaló, hogy az Vb' képletű vegyület a IVa képletű vegyülettel szerkezetileg rokon, azonban az 25 utóbbi vegyülettől abban különbözik, hogy a ciklohexéngyűrű 4-helyzetében egy további glükopiranozilcsoportot hordoz. Az Va' képlettel jellemzett szerkezetű izomer létezését az előbb említett hidrogénező lebontás során kép-30 ződő 0-(4-amino-4,6-bisz-dezoxi-a-D-glükopiranozil)-(1 -*• 4) -O -a -D -glükopiranozil -(1 ->• 4) -O -a -D -glükopiranozil-(l-*4)-D-glükopiranóz és l-hidroximetil-2,3,4-trihidroxi-ciklohexán bizonyítja (lásd a B reakcióvázlatot). További vizsgálatokban az Va' és Vb' képletű izo-35 mereket ismert módszerekkel metileztük, hidrolizáltuk, nátrium-bór-hidriddel redukáltuk, acetileztük és gázkromatográfiásán elemeztük. Míg az Va' képletű izomerből így csak l,4,5-tri-0-acetil-2,3,6-tri-0-metil-D-glucit-képződik, addig az Vb' képletű izomerből 2:1 40 mólarányban l,4,5-tri-0-acetil-2,3,6-tri-0-metil-D-glucit és l,5-di-0-acetil-2,3,4,6-tetra-0-metil-D-glucit. Az Va' és Vb' képletű izomerek egymástól kromatográfiásan, savanyú ioncserélőgyantán 0,025 normál sósavoldattal eluálva elválaszthatók. 45 A „II. komponens"-t fizikai-kémiai tulajdonságaiban és reakcióképességében az alábbi módon jellemezhetjük: A II. komponens színtelen, amorf szilárd anyag, amely jól oldódik vízben, dimetilformamidban, dime-50 tilszulfoxidban és metilalkoholban. Melegen etilalkoholban is oldódik. a) Vékonyrétegkromatográfia Futtatószer: etilacetát-metilalkohol-víz 10: 6: 4 55 (DC-kész lemezek = vékonyrétegkromatográfiához használható kész lemezek) I. F 1500 Kieselgel-lel készített DC-kész lemezek (a Kieselgelt gyártja Schleicher und Schüll) 60 Rf-értékek: II. komponens 0,46 maltóz 0,50 glükóz 0,65 II. F 254 Kieselgel-lel készített DC-kész lemezek (gyártja 65 Merck) 4
