170645. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, 2-oxo-oxazolidin- vagy 2-oxo-tiazolidingyűrűt tartalmazó tripeptidek előállítására
5 170645 6 terhesség meggátlására. Az I általános képletű vegyületek hagyományos gyógyszerkészítmények, így például tabletták, kapszulák, porkészítmények, szemcsék vagy injekciós oldatok formájában adhatók be. Ezek a gyógyszerkészítmények ismert mó- 5 don állíthatók elő. Valamely I általános képletű vegyületből például úgy készítünk injekciós oldatot, hogy a vegyületből 100 7-t feloldunk 1 ml fiziológiás sóoldatban. Mannittal végzett liofilizálás után valamely I általános képletű vegyület fagyasztva is 1° tárolható, felhasználása előtt pedig fiziológiás sóoldatban feloldjuk. Az I általános képletű vegyületek dózisa az adott vegyülettől, a betegség szimptómáitól, a kezelt lény jellegétől, stb. függ. Injektálással végzett egyszeri beadás alkalmával egy test- 15 súlykilogrammra a dózis rendszerint mintegy 1 y és mintegy 1 mg, míg orális beadás esetén mintegy 10 7 és mintegy 100 mg között változik. A találmányt közelebbről az alábbi példákkal kívánjuk megvilágítani. A találmány szerinti eljárás- 20 ban kiindulási vegyületekként használt aminosavak és peptidek előállítására szolgáló ismert eljárásokat az alábbi referenciapéldában mutatjuk be. Referenciapélda 25 L-2-Oxo-4-karboxi-oxazolidin előállítása 960 ml 12,5%-os vizes kálium-hidroxid-oldatban feloldunk 27,3 g (0,26 ml) L-szerint, majd a kapott 30 oldathoz 4—5 C°-ra végzett hűtés és élénk keverés közben 58 g foszgén 40 ml toluollal készült oldatát adjuk cseppenként 75 perc leforgása alatt. A kapott elegyet 4—7C°-on egy órán át keverjük, majd egy óra elteltével a toluolos fázist elkülönítjük. A 35 vizes fázist kétszer 250 —250 ml éterrel mossuk. A vizes fázist ezután 3 normál sósavoldattal megsavanyítjuk pH 3 értékre, majd ezt követően a vizet csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot 800 ml forró metanollal extraháljuk, majd az ext- 40 raktumból a metanolt ledesztilláljuk. A kapott maradékot vízben feloldjuk, és a vizes oldatot erősen savas ioncserélőgyantával (azaz a Dow Chemical Co. Amerikai Egyesült Államok-beli cég által előállított Dowex-50 márkanevű gyantával) töltött, 45 3,5 x 38 cm méretű oszlopon átbocsátjuk, majd az oszlopot vízzel mossuk. A vizes mosóoldatot és az eluátumot egyesítjük, majd a 350 ml-nyi elegyet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot alaposan szárítjuk, majd etil-acetát és petrol- 50 éter elegyéből átkristályosítjuk. így 16,6 g (48%) L-2-oxo-4-kar,boxi-oxazolidint kapunk. Olvadáspont: 112-113C°, Mr38=-18,7° (c = l,víz), Elemzési eredmények a C4 H 5 0 4 N képlet alapján: 55 számított: C =36,65%, H =3,85%, N = 10,69%, talált: C =36,86%, H =3,68%, N = 10,67%. 60 A fentiekben ismertetett, illetve hasonló módon az alábbi kiindulási vegyületek állíthatók elő: L-2--oxo-4-karboxi-tiazolidin, olvadáspontja 170— —172 C°, és L-transz-5-metil-2-oxo-4-karboxi-oxazolidin, olvadáspontja 134-136 C°. 65 A találmány szerinti eljárás illusztrálására az alábbi példák szolgálnak. 1. példa L-2-Oxo-oxazolidin-4-karbonil-L-hisztidil-L-prolinamid ( C Ser-His-Pro-NH 2 ) előállítása 0,1 ml anizol jelenlétében feloldunk 1,1 g (2,55 millimól — a továbbiakban a millimólt „mmól" jelöléssel rövidítjük) izoborniloxi-karbonil-L-hisztidil-L-prolinamidot 10 ml trifluor-ecetsavban, majd a kapott oldatot szobahőmérsékleten 40 percen át állni hagyjuk. Ezután az oldahoz 2 ml, 4 normál, dioxánnal készült sósavoldatot adunk, majd a kapott elegyet bepároljuk. A maradékot éterrel kezeljük, majd a képződött port kiszűrjük és nátrium-hidroxid felett exszikkátorban szárítjuk. így por alakjában az L-hisztidil-L-prolinamid-dihidrokloridot kapjuk. (Ugyanez a vegyület előállítható benziloxikarbonil-L-hisztidil-L-prolinamid etanolban két mólekvivalens hidrogén-klorid és katalizátorként palládiumkorom jelenlétében végzett redukálása, majd a katalizátor kiszűrése és a szürlet csökkentett nyomáson végzett bepárlása útján is.) Az így kapott port 400 mg (3,08 mmól L-2-oxo-4-karboxi-oxazolidinnel és 550 mg (3,08 mmól) N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximiddel együtt feloldjuk 5 ml dimetil-formamidban, majd a kapott oldathoz jéggel végzett hűtés közben 0,67 ml N-etil-morfolint adunk. Ezután a reakcióelegyhez még 635 mg (3,08 mmól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet adunk, majd a reakcióelegyet 12 órán át keverjük. Ezt követően az elkülönülő diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A kapott maradékot ezután kloroform és metanol 9 : 1 arányú elegyében feloldjuk, majd az így kapott oldatot szilikagélből készült, 4 x 8 cm méretű oszlopra felvisszük. Az oszlopot kloroform és metanol 7 :3 arányú elegyével mossuk, és az előállítani kívánt terméket 60%-os vizes metanollal eluáljuk. Az eluátumot csökkentett nyomáson desztilláljuk, és a kapott maradékot vízben feloldjuk, majd a vizes oldatot gyengén savas kationcserélő gyantával (azaz a Pharmacia A.S. svéd cég Carboxymethyl-Sephadex® márkanevű termékével) töltött, 2 x 30 cm méretű oszlopra felvisszük. Az oszlopot a gradiens-eluálás módszerével kezeljük, éspedig 0,005 mól és 0,2 mól közötti molaritású vizes ammónium-acetát-oldatokkal (500 ml/500 ml) eluálunk 160 ml-es frakciókat szedve. Az előállítani kívánt termék a 390 ml és 550 ml eluátummenyiségnek megfelelő frakciókban jelenik meg. Ezeket a frakciókat összegyűjtjük, majd liofilizáljuk. így 523 mg (56%) súlyú fehér por alakjában az L-2-oxo-oxazolidin-4-karbonil-L-hisztidil-L-prolinamid acetátját kapjuk. [a]rj2 = - 45,3° (C = 0,53 ecetsav), aminosav analízis (5,7 n sósavoldat, 105 C°, 16 óra): Ser : His: Pro = 0,85 : 1,03 :1,00. 3
