170618. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a Marek-féle betegség elleni vakcína előállítására
170618 1. táblázat db Dózis (PFE/csibe) Vírus visszaizolálása Szerológiai reakció (AGP) MB pozitív MB negatív Fertőzött csoport Kontroll csoport 13 98200 19. napon + 77. napon + 19. napon — 77. napon -+ + 0/11 0/5 4. példa Az 1RS izolátum védőképességének meghatározására az 1. példában előállított, folyékony nitrogénben tárolt anyag 932 plakkformáló egység/csibe dózisával intra-abdominálisan oltunk genetikailag nagyon fogékony csirkéket. A 3. példában leírt módon izoláltan helyezzük el az egyes csoportokat. A vakcinázás utáni 18. napon a vakcinázott és oltatlan kontroll állatok felét heveny MBHV-val fertőztük intra abdominálisan. A vakcinázott, de nem fertőzött csoport egészséges maradt a kísérletet végéig, az oltatlan kontroll csoporttal együtt. A vakcinázott és a 18. napon ráfertőzött 15 csoportból 1 állat elhullott, l-ben pedig az MB-re jellemző daganatot észleltünk a kiirtáskor. Ebből a csoportból a többi állat kórbonctanilag negatív volt. A kontroll nem vakcinázott, de a 18. napon vadvírussal ráfertőzött csoportból a kísérlet végéig 20 minden állat elhullott. A vakcinázott és fertőzött csoport eredménye alapján megfelelő védelmet nyújtott az 1RS jelzésű izolátum. A kísérlet eredményét a 2. táblázat összesíti. 25 2. táblázat Vakcinázott csoport Vakcinázott és fertőzött csoport Kontroll csoport Kontroll és fertőzött csoport db Dózis (PFE) 13 932 105 ' 2 Visszaizolálás Elhullott MB pozitív/ MB negatív 105 ' 2 18. napon + 57. napon + 18. napon -57. napon -18. napon 0/7 116 0/6 6/6 0/7 1/5 0/6 6/6 5. példa 50 A 2. példa anyagának folyékony nitrogénben tárolt sejtjeiből 24 órás SPF CSEF tenyészetet fertőztünk. 0—96 óráig 24 óránként mintát vettünk, amelyet felhasználásig -196C°-on tároltunk. Az 55 utolsó minta levétele után meghatároztuk az egyes időpontokban a sejthez kötött és ultrahanggal kezelt, sejtmentes vírus titerét. Az ultrahang kezelés során 1,5 amper áramerősséggel 2 ml folyadékban MSE ultrahang készülékkel 10 másodpercig 60 kezeltük a sejtes anyagot. Az így feltárt sejtmentes vírus titere vagy megegyezett a sejtes anyag titerével (106,9 -10 6,8 PFE/ml), vagy annál alacsonyabb értéket adott (105>9 -10 6,6 plakkformáló egység/ml). 65 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás élő legyengítetten 1RS pulyka-herpesz vírus törzset tartalmazó sejthez kötött vagy sejtmentes vírusvakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy az Országos Közegészségügyi Intézetben 00123 szám alatt letétbe helyezett 1RS jelzésű pulyka-herpesz vírus törzzsel csirkeveséből, csirkeembrió-fibroblasztból vagy kacsaembrió-fíbroblasztból származó szövettenyészetet beoltunk, a beoltott tenyészetet inkubáljuk, majd a sejteket elkülönítjük az inkubált tenyészetből és friss tenyészetre helyezzük, és így sorozatos sejttenyésztést végzünk, majd a) sejthez kötött vírusvakcina előállítása esetén a tenyésztés utolsó szakaszában a sejteket trip-4
