170607. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai vizsgálati lemez
9 170607 10 A szuszpenziót centrifugálással tisztítjuk, 30 percig 56C°-on inkubáljuk, újra centrifugáljuk, és 0,2% nátriumazidot adunk hozzá. A birka vörösvérsejt és a tengerimalac szuszpenzió egy-egy cseppjét (0,03 ml) közel egymáshoz 5 megfelelő lemezre cseppentjük és a levegőn megszárítjuk. A próba kivitelezéséhez egy csepp (0,06 ml) szérumot, plazmát, vagy friss teljes vért cseppentünk ezekre a beszárított reagensekre és a keveréket enyhén rázzuk, hogy a reagens a szérum- 10 ban, plazmában vagy vérben feloldódjék, vagy szuszpendálódjék. A pozitív vizsgálati eredményt kék szemcsék formájában észlelhető agglutináció jelzi. A reakciót úgy is végezhetjük, hogy a birka vörösvérsejt reagenst először egy csepp vízben vagy 15 pufferben reszuszpendáljuk és azután egy csepp szérumot, plazmát vagy vért adunk hozzá. Hasonlóképpen megtehetjük, hogy az egyik reagenst — elsősorban a tengerimalac szövetkivo- 20 natot a szárított birka vörösvérsejt szuszpenzió cseppre helyezzük. A szárított birka vörösvérsejt reagens bizonyos mértékig feloldódik a föléje helyezett második cseppben. Ennek az oldásnak minimumra való csökkentése érdekében az első rea- 25 genshez kb. 7-10% (súly/térfogat) cukrot pl. szacharózt adhatunk. Ezáltal a szárított csepp felülete sima és kemény lesz, és ha a reá helyezett cseppet gyorsan megszárítjuk, úgy az első cseppben levő reagenseknek az oldódása a másodikban mi- 30 nimumra csökken. 4. példa 35 Szárított szemcsés antigén ellenanyag által való közvetlen agglutináció Glutaraldehyddel vagy formaldehyddel kezelt és tartósított, ismert vércsoportú teljes human vörös- 40 vérsejteket az előzőkben leírt módon nedvesíthető, nem abszorbeáló sima felületen megszárítunk. Emberi szérum, vagy plazma hozzáadására bekövetkező agglutináció jellemző a véradó vércsoportjára. 45 Ismert vércsoport specificitású, frissen nyert emberi vörösvérsejteket 0,15 mólos nátriumklorid oldattal mossuk, centrifugálással ülepítjük 4C°-ra lehűtjük, majd olyan 25 térfogat%-os glütaraldehid oldatban szuszpendáljuk, amelyet a 9 térfogat 50 0,5 mólos nátriumklorid oldat, 1 térfogat 0,15 mólos nátriumfoszfát oldat 8,2 pH-jú keverékével és 5 térfogat desztillált vízzel 1%-os töménységűre hígítottunk. A szuszpendáláshoz annyi glutaraldehyd-oldatot használunk, hogy a szuszpenzió 1—2% 55 vörösvérsejtet tartalmazzon. A fixált vörösvérsejteket centrifugálással összegyűjtjük, 0,15 mólos nátriumklorid oldattal 5-ször mossuk és végül annyi desztillált vízben szuszpendáljuk, hogy a keverék vörösvérsejt tartalma 30% legyen. Tárolás céljából a keverékhez 1:10 000 arányban thimerosalt adunk. (Lásd: Bing, D.H. et. al Proc. Soc. Ep. Biol. a. Med. 124:1166-1170 « 1967). 65 A fentiek szerint előállított, ugyanarra a lemezre A és B vércsoportú emberi vörösvérsejtek l-l cseppjét (0,03 ml) helyezzük és a cseppeket áramló meleg levegővel megszárítjuk. Mindkét szárított foltra l-l csepp szérumot vagy plazmát cseppentünk, amelynek a vércsoportját meg kívánjuk határozni. A szárított vörösvérsejteket keveréssel szuszpendáljuk. Ezeknek az ismert vércsoportú szuszpendált vörösvérsejteknek az agglutinációja az adott vércsoport anyag elleni ellenanyagok jelenlétét bizonyítja. Az A és/vagy B vörösvérsejtek agglutinációjával vagy az agglutináció hiányával a véradó szérumának, vagy plazmájának vércsoportja könnyen meghatározható. 5. példa Szemcsés antigén közvetlen agglutinációja szárított antiszérummal Az antiszérumot nedvesíthető, nem-abszorbeáló felületen szárítjuk meg, a szemcsés antigén szuszpenziójával oldjuk és az antigénnel reagáltatjuk, vagy feloldjuk és úgy reagáltatjuk a szemcsés antigénnel. A human anti-vércsoport -anyagokat üveglemezen (vagy más alkalmas felületen) megszárítva és reagáltatva, a teljes emberi vérből származó vörösvérsejtek vagy sóoldattal mosott, vagy szuszpendált humán vörösvérsejtek agglutinációját idézhetjük elő. Ismert vércsoport anyag elleni ellenanyagokat tartalmazó szérumot vagy plazmát - pl. kereskedésben' típus-savót — lemezeken megszárítva vércsoport meghatározó reagensként használhatunk. A és B vércsoport anyag elleni immunsavó 1 — 1 cseppjét (0,03 ml) egymás mellé lemezre cseppentjük és áramló meleg levegővel megszárítjuk. Mindegyik folthoz hozzáadunk a tipizálandó emberi vörösvérsejtek 1—2%-os szuszpenziójából 1—1 cseppet és a kapott szuszpenziót 2 percig enyhe körkörös mozgatással rázzuk. Az agglutináció jelzi, hogy a vörösvérsejtek az agglutinációt előidéző anti-szérum típusához tartoznak. Azt is megtehetjük, hogy az ujjhegy tűvel történő szúrásával nyert frissen vett vért közvetlenül a lemezen levő szárított reagens foltokra helyezzük és 1—1 csepp sóoldattal megfelelően hígítjuk. Ha a vér a szárított anti-szérummal megegyező csoportú vörösvérsejteket tartalmaz, úgy könnyen észlelhető agglutináció jön létre. Szabadalmi igénypontok: 1. Diagnosztikai vizsgálati lemez, amelynek felülete immunkémiai vagy diagnosztikai reakció észlelésére, ül. végrehajtására alkalmasan van kialakítva, azzal jellemezve, hogy egy lényegében sík, szubsztrátumból álló csíkkal van ellátva, amelynek legalább egy vízben oldhatatlan, vízátnemeresztő, vizet nem abszorbeáló és vízzel nedvesíthető vizsgálati felülete van, a felületen legalább egy elhatárolt körkörös vizsgálati terület van kiképezve, amely 5
