170464. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-helyettesített 7béta-(D-5-amino-5- karboxivaleramido)- 7-metoxi-cef-3- em-4- karbonsav-származékok előállítására
170464 10 4. példa S-[7ß-(D-5-amino-5-karboxivaleramido)-4--karboxi-7-metoxi-cef-3-em-3-il-metil]-tiourónium-származék 100 mg 842A antibiotikumot 26 mg tiokarbamiddal 8 percig melegítünk 95 C° hőmérsékleten 5 ml 0,5 mólos foszfát-pufferoldatban (3,5 g nátriumdihidrogénfoszfát és 3,4 g dinátriumfoszfát 100 ml vízben oldva, majd a pH-érték sósavval 5-re állítva). A kapott oldatot azután 7 pH-értéken elektroforézissel vizsgáljuk, azt találjuk, hogy a tiourónium-származék nem vándorol, míg a 842A antibiotikum 0,2 körüli Rf-értéket mutat. A kapott elegyet polisztirol-szulfonsav kationcserélő gyantán (Dowex 50, hidrogén-ciklusban) adszorbeál tátva tisztítjuk a foszfát-puffer eltávolítása céljából. 0,1 n piridin-oldattal eluálunk. Az eluátum pH-értékét n nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával 8-ra állítjuk majd a visszamaradt piridin eltávolítása céljából vákuumban bepároljuk. A maradék liofilizálása útján cserszínű por alakú termé-10 15 20 25 ket kapunk, amelyet S-[7ß<D-5-amino-5-karboxivaleramid o)-4-karboxi-7-metoxi-cef-3-em-3-il-metilJ-tiourónium-származékként azonosítottunk. A fenti módon kapott termék jellemző adatai: Vékonyréteg-kromatográfia: 25%-os vizes atetonitrilben, cellulóz-lemezen Rf -érték 0,15, a 842A antibiotikum dinátrium-sójának Rf-értéke ugyanilyen körülmények között 0,3. Ibolyántúli színkép: Xma x 263 millimikron, molekuláris kioltási együttható kb. 5700 (elméleti érték: 8000). Infravörös színkép: nujolban abszorpció 1780 cm-1 értéknél (béta-laktám-gyűrű jelenlétét mutatja). A termék pozitív ninhidrin-próbát mutat, ami egy alfa-amino-adipoil-oldallánc jelenlétét mutatja. Elektroforézis: az 1000V feszültséggel, 0,05 mólos foszfát-pufferoldatban, 7 pH-értéken végzett elektroforézis pozitív töltésnek a termékben való jelenlétét mutatja, a termék Rf -értéke 0,01, a 842A-dinátriumsó Rf-értéke 0,4. Biológiai értékmérés: a termék különféle mikroorganizmusokkal szemben az alábbi táblázatban megadott átmérőjű gátlási zónákat mutat a szokásos korong-módszerrel vizsgálva, 100 mcg/ml koncentrációban: Mikroorganizmus A 842A S-[70-(D-5-amino-5-karboxidinátrium-sója valeramido)4-karboxi-7-metoxi(100 mcg/ml) -cef-3-em-3-il-metil]-tiourónium-származék (100 mcg/ml) Vibrio percolans MB-1272 Salmonella gallinarium MB-1287 >35 27 27 23 Pseudomonas stutzeri MB-1231 22 22 Proteus vulgaris MB-838 27 5. példa 70-(D-5-amino-5-karboxivaleramido)-3--(4-metiltiazol-2-il-merkaptometil)-7--metoxi-cef-3-em-4-karbonsav A) 7(3-(D-5-N-terc.butoxikarbonilamino-5--karboxivaleramido)-3-(karbamoiloximetil)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav 1,0 g 842A-dinátriumsót 31,6 ml 5%-os dikáliumfoszfát-oldatban oldunk és keverés közben 20,8 ml acetont adunk hozzá. Az oldat pH-értékét ezután nátriumhidroxiddal 9,5 és 9,6 közöttire állítjuk be, majd keverés közben 1,0 ml tercbutoxikarbonilazidot adunk hozzá. A kéverést szobahőmérsékleten 4-6 óra hosszat folytatjuk, miközben a reakcióelegy pH-értékét nátriumhidroxid szükséghez képest történő hozzáadásával 9,0 és 9,6 között tartjuk. A reakcióelegyet ezután éjjelen át 45 50 55 60 65 17 további pH-korrigálás nélkül keverjük, eközben a pH-érték 8,5-re csökken. Másnap a pH-értéket nátriumhidroxid hozzáadásával ismét 9,6-ra állítjuk és az elegyet további 3 óra hosszat keverjük, miközben a pH-értékét ismét 9,0 és 9,6 között tartjuk. Ezután a reakcióelegyet 0,5 tf. etilacetáttal extraháljuk, az etilacetátos fázist kiontjuk, a vizes fázist jégfürdőbe állítjuk, 0,5 tf. etilacetátot adunk hozzá és tömény sósavval 2,5 pH-értékre savanyítjuk, miközben az elegy hőmérsékletét 5 C° alatt tartjuk. Az etilacetátot ismét elkülönítjük, a vizes oldatot 2,5 pH-értéken még kétszer extraháljuk 0,5-0,5 tf. etilacetáttal. Az ibolyántúli abszorpció-mérések azt mutatják, hogy a kiinduló ibolyántúli-abszorbens mennyiségének 50%-a az említett kivonatokban jelenik meg, míg az elfolyó vizes fázis 22%-ot tartalmaz. A kivonatokat egyesítjük és bepároljuk szárazra, maradékként 645 mg 7j3-(D-5-N-1 e r c.bu tox i karbonilamino-5-karboxivaleramido)-3--( karba mo iloximetil)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsa-5
