170340. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximid alkalmazásával
7 170340 8 hogy az N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximid magas kitermelési százalékkal különíthető el. A találmány szerinti eljárást a következőkben példákkal szemléltetjük. A példákban használt aminosavak, hacsak másképp nem adjuk meg, kivétel nélkül ^konfigurációjú vegyületek. A következőkben használt rövidítések a következő jelentésűek: H-(Py)Glu-OH = piroglutaminsav H— Glii— OH = glutaminsav H-Ala-OH = alanin H-Gli-OH = glicin H-Val-OH = valin H— Fen-OH = fenilalanin H—Ileu—OH = izolencin H-Gln-OH = glutamin H—Asn—OH = aszparagin H-His-OH = hisztidin H-Trp-OH = triptofán H—Arg—OH = arginin H-Ser-OH = szerin H-Tyr-OH = tirozin H-Met-OH = metionin H-Lys-OH =lizin H-Orn-OH = ornitin Z— = karbobenzoxicsoport BOC= t-butiloxikarbonücsoport —OMe = metilésztercsoport —OEt = etilésztercsoport —OBzl = benzilésztercsoport —OtBu = t-butilésztercsoport —ONBI = N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximidésztercsoport —OPCP = pentaklórfenilésztercsoport —IBOC = izoborniloxikarbonilcsoport —ONP = p-nitrofenilésztercsoport HONBI = N-hidroxi-5-norbomén-2,3-<Ii-karboximid DCC = N,N'-diciklohexilkarbodiimid DMF = dimetilformamid THF = tetrahidrofurán. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatokat a következő oldószerelegyekkel végezzük: 1. Kloroform, metanol, jégecet 9:1:0,5 arányú elegye. 2. Etilacetát, piridin, ecetsav, víz 60:20:6:11 arányú elegye. 3. n-butanol, etilacetát, ecetsav, víz 1:1:1:1 arányú elegye. 4. n-butanol, ecetsav, víz 4:1:1 arányú elegye és 5. n-butanol, piridin, ecetsav, víz 30:20:6:24 arányú elegye. 1. példa Az N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximid előállítása 120 ml vízben 52,6 g hidroxilamin—HCl-ot oldunk, az oldatban rázás közben 41 g nátriumkarbonátot oldunk. Az elegyhez ezután 100 g 5-norbornén-2,3-dikarbonsavanhidridet (az 5-norbornén-2,3-dikarbonsav anhidridje) adunk. Amikor ez utóbbi vegyület feloldódott, 60—70 C° hőmérsékletű vízfürdőben 1 órán át hidegen állni hagyjuk az elegyet. Az oldatból kivált kristályokat szűréssel elkülönítjük. A termék 165,5—167 C° hőmérsékleten olvad; kitermelés 98%. A kristályos anyagot a lehető legkisebb mennyiségű tetrahidrofuránban oldjuk, majd meleg étert adunk az oldathoz. 5 Amikor az elegyből kristályok kezdenek kiválni, megszüntetjük az éter adagolását és lehűtjük a szuszpenziót. A terméket (olvadáspontja 167—167,5 C°; irodalmi érték 165—167 C°) szűréssel elkülönítjük és éterrel mossuk. Kitermelés: 92,6 g anyag, 84,9%. 10 2. példa A Z-(Pyr)Glu-ONBI előállítása 200 ml THF és 200 ml dioxán elegyében 24 g (90 mmólM) Z-(Pyr)Glu-OH-at oldunk, majd lehűtjük 15 az oldatot és 17,8 g HONBI-et és 21 g DCC-et adunkhozzá. Az elegyet jégfürdőn 20 percen át keverjük, majd szobahőmérsékletre melegítjük és további 40 percen át keverjük. Az ezen idő alatt keletkező diciklohexilkarbamid mellékterméket szűréssel eltá-20 volítjuk. A szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk, amikor desztillációs maradékként kristályos anyagot kapunk. Ezt etilacetát és petroléter elegyéből kikristályosítva tűkristályos termékként 36 g (kitermelés 94%) 25 anyagot kapunk. A termék olvadáspontja 143,5—144 C°; kip = -41,9° (c = 0,2, etanol). Elemanalízis a C22 H 20 0 7 N- (424,40) képlet alapján: számított: C 62,26%; H4,75%; N 6,60%; 30 mért: C 62,47%; H 4,73%; N 6,55%. 3. példa A Z-Glu-(OtBu)-ONBI előállítása 200 ml dioxánban 16,82 g (50 mM) Z-Glu-35 (OtBu)-OH-t és 9,76 g (55 mmólM) HONBI-t oldunk, az oldatot jégfürdőben lehűtjük és 11,35 g (55 mmólM) DCC-et adunk hozzá. Szobahőmérsékleten 4 órán át keverjük a reakcióelegyet, a keletkezett diciklohexilkarbamidot szűréssel elkülönítjük. 40 A szűrletet és a melléktermék mosásából származó mosófolyadékot egyesítjük és csökkentett nyomáson szárazra desztilláljuk. A desztillációs maradékként kapott olajhoz petrolétert adunk, így kristályok válnak ki belőle. A terméket szűréssel elkülönítjük és 45 etilacetát, petroléter elegyéből kikristályosítjuk, így finom tűkristályos anyagot kapunk. Kitermelés: 82%, 42 g anyag. A termék olvadáspontja 120—121 C°; [a]g = -32,0° (c = 0,96, metanolban). Elemanalízis a C26 H30 0 8 N 2 -képlet alapján: 50 számított: C 62,64%; H 6,07%; N 5,62%; mért: C 62,81%; H 6,05%; N5,78%. 4. példa A Z-(Pyr)Glu-Glu-(OBzl)-OH előállítása 55 50 ml dioxán és 40 ml víz elegyében 2,6 g (1,1 mmól) H—Glu—(OBzl)—OH-t szuszpend álunk, a szuszpenzióhoz 1,5 ml trietilamint adunk, majd felmelegítjük, amikor oldatot kapunk. Az oldatot jégfürdőben gyorsan lehűtjük és 3,4 g 60 (8 mmólM), a 2. példa szerinti eljárással előállított kristályos Z-(Pyr)-Glu-ONBI-t adunk hozzá. Ezután 5 órán át szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet. A dioxánt csökkentett nyomáson desztillációval eltávolítjuk, a desztillációs maradékhoz 65 15 ml 1 n sósavat adunk, majd kétszer 20 ml 4
