170340. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximid alkalmazásával
170340 21 22 zárjuk. így ampullánként 50 gamma LH—RH-t tartalmazó készítményt állíthatunk elő. 9. A H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Lys-Pro-Gly-NH2 előállítása 20 ml metanolban 500 mg Z-Leu-Lys-(IBOC) £— Pro—Gly—NH2 -t oldunk, az oldatot 300 mg palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A redukció lejátszódása után a katalizátort szűréssel, a metanolt desztülációval eltávolítjuk, a desztillációs maradékhoz étert adunk. A keletkezett csapadékot szűréssel elkülönítve 400 mg H—Leu—Lys—(IBOC)— Pro-Gly-NH2-t kapunk. 188 mg por alakú terméket 3 ml DMF-ban oldunk, az oldatot 0 C° hőmérsékletre hűtjük és 240 mg H-(Pyr)-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-HCl-ot, 0,084 ml trietilamint, 80,6 mg DCC-et és 70,2 mg HONBI-et adunk hozzá. 4 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd további 8 órán át szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet. A melléktermékként keletkezett diciklohexilkarbamidot szűréssel elkülönítjük, a szűrlethez etilacetátot adunk. A kivált csapadékot szűréssel elkülönítjük, súlya 270 mg. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok szerint a termék szennyeződéseket tartalmaz. Ezért Amberlite XAD-II (2,4 x 19 cm) kromatografáló oszlopon tisztítjuk, a gradiens eluciót 0,05 m ammóniumacetáttal és 5% — 70%-os etanollal végezzük. Az aktív frakciókat összegyűjtjük, csökkentett nyomáson desztillálva eltávolítjuk az etanolt és liofilizáljuk. így 147 mg tiszta terméket kapunk. A fentiek szerint előállított vegyület 100 mg-nyi mennyiségét 3 ml, 0,1 ml anizolt tartalmazó trifluorecetsawal keverjük, majd csökkentett nyomáson desztilláljuk. A száraz desztillációs maradékot éterrel mossuk és vízben oldjuk. Az oldatot acetát alakú Amberlite IRA—400 kromatografáló oszlopon engedjük át, amikor megkapjuk a termék acetátszármazékát, amit ezután liofilizálunk. Az előállított termék súlya 88 mg; [a]$ = -55,4° (c = 0,5, 5%-os ecetsavban). Az 5. oldószereleggyel vizsgált papírkromatográfiás Rr érték:0,51. -Aminosavanalízis: Lys 0,96, His 1,04, Ser 0,85, Glu 1P0, Pro 1,00, Gly 2,00, Leu 1,00, Tyr 1,04, Trp (ultraibolya) 0,98. 10. A H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu—Orn—Pro—Gly—NH2 előállítása Fluorecetsav és diklórmetán 1:1 arányú elegyének 5 ml-ében 380 mg BOC-Leu-Orn-(Z)-Pro-Gly-NH2 -t oldunk, az oldatot 40 percen át szobahőmérsékleten keverjük. Csökkentett nyomáson desztülációval eltávolítjuk az oldószert, a száraz desztillációs maradékhoz 1 ml 3 n sósav-jégecet elegyet adunk. Ezután étert adunk az elegyhez és a kivált csapadékot szűréssel elkülönítjük. 280 mg H-Leu-Orn-(Z)Pro-Gly-HCl-ot kapunk. Az előzőek szerint előállított termék 170 mg-ját 3 ml DMF-ban oldjuk, az oldatot jégfürdőben lehűtjük, és 200 mg H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-HCl-ot, 0,084 ml trietilamint és 64,4 mg HONBI-et adunk hozzá. 74,2 mg DCC-del egészítjük ki a reakcióelegyet és 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd 8 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A melléktermékként keletkezett diciklohexilkarbamidot szűréssel elkülönítjük, a szűrlethez 20 ml etilacetátot adunk. A kivált csapadékot szűréssel elkülönítjük és szárítjuk, amikor 290 mg terméket kapunk. Ennek 250 mg-ját 2,4 x 19 cm méretű Amberlite XAD-II kromatografáló oszlopon tisztítjuk, az eluálást (gradiens) 5—70%-os etanollal végezzük. 5 Az [Orn-(Z)]8 -LH-RH-t tartalmazó eluátumot az etanol eltávolítására csökkentett nyomáson bepároljuk, a desztillációs maradékot liofilizáljuk. így 170 mg tiszta terméket kapunk. Ennek 150 mg-ját 20 ml metanolban oldjuk és 500 mg palládium jelenlétében 10 katalitikusan redukáljuk. 6 órán át tartó hidrogénezés után a katalizátort szűréssel elkülönítjük, a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A száraz desztillációs maradékot vízben oldjuk és liofilizáljuk, amikor 120 mg súlyú terméket kapunk; [a]p = —61,0° (c= 15 '0,5, 5%-os ecetsavban). A terméknek az 5. oldószereleggyel vizsgált papírkromatográfiás Rf-értéke 0,51. Aminosavanalízis: His 1,09, Orn 1,05, Ser 0,93, Glu0,92, Pro0,93, Gly 1,90, Leu 1,01, Tyr 0,93, Trp (ultraibolya) 0,97. 17. példa LH—RH-rokon vegyületek előállítása II. 1. Az IBOC-Gly-Arg-(N02 )-Pro-Gly-NH 2 25 előállítása 5 ml DMF-ban 1,8 g IBOC-Gly-OH-t és 1,76 g p-nitrofenolt oldunk. Az oldatot jégfürdőben lehűtjük, 1,6 g DCC-et adunk hozzá és egy éjszakán át keverjük. A diciklohexilkarbamid mellékterméket 30 szűréssel elkülönítjük, így IBOC—Gly—DNP oldatot kapunk. 1,8 g Z-Arg-(N0 2)-Pro-Gly-NH 2 -t Z-csoport mentes termék előállítására a fenti eljáráshoz hasonló eljárással kezelünk. A keletkező por alakú terméket 5 35 ml DMF-ban oldjuk. Az oldatot jégfürdőben lehűtjük és 0,6 ml trietilamint, majd az előzőek során előállított IBOC-Gly-ONP-t adjuk hozzá. Ezután egy éjszakán át keverjük a reakcióelegyet. Étert adunk hozzá, a kivált csapadékot szűréssel elkülönítjük és 40 éter-etilacetát elegyből ismételten kicsapjuk. így 1,8 g (kitermelés: 82%), 129-131 C° olvadáspontú (bomlik) terméket kapunk; az 1. oldószereleggyel vizsgált papírkromatográfiás Rr értéke: 0,6. Elemanalízis a C26 H43 0gN9 • H 2 0- képlet 45 alapján: számított: C 49,73%; H 7,22%; N 20,09%; mért: C 49,93%; H 7,13%; N 19,34%. 2. A Z-Phe-Arg-(N02)-Pro-Gly-NH 2 előállítása 50 0,50 g (1 mM) Z-Arg-(N02 )-Pro-Gly-NH 2 -t a 16. példa 6. pontjában ismertetett eljárás szerint kezelünk, amikor por alakú terméket, H—Arg— (N02)-Pro-Gly-NH 2 -HBr-t kapunk. Ezt 5 ml DMF-ban oldjuk, az oldathoz 0,30 g (1 mmólM) 55 Z-Phe-OH-t és 0,18 g (1 mmólM) HONBI-et adunk. A reakcióelegyet 0,15 ml trietilaminnal egészítjük ki, majd 0 C° hőmérsékletre hűtjük és 0,22 g DCC-et adunk hozzá. 8 órán át keverjük az elegyet. A melléktermékként keletkező karbamidot szűréssel el-60 különítjük, a DMF-ot csökkentett nyomáson desztillálva eltávolítjuk. A desztillációs maradékhoz étert és etilacetátot adunk, a keletkezett csapadékot szűréssel elkülönítjük, amikor 0,50 g (kitermelés: 90%) terméket kapunk. 65 Az így előállított vegyületnek az 1. oldószer-11
