170334. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmusok tenyésztésére
13 170334 14 6. táblázat Aminosavtartalom Aminosav JMS 72 EN Aszparaginsav 9,41 9.67 Treonin 4,29 4,60 Szerin 3,18 3,33 Glutaminsav 9,84 10,13 Prolin 3,17 2,73 Glicin 5,63 5,63 Alanin 6,78 7,00 Valin 5,72 6,21 Cisztin(l/2) 0,29 0,29 Metionin 1,85 lß2 Izoleucin 4,46 5,01 Leucin 7,71 7,95 Tirozin 2,97 3,46 Fenilalanin 3,93 3,96 Ammónia 2,21 2,17 Lizin 7,30 6,68 Hisztidin 1,75 2,05 Arginin 4,98 5.00 Ezek a számadatok azt jelzik, hogy a metanolt nem hasznosító mikroorganizmusok jelenléte a JMS 72 jelű vegyes tenyészetben nem befolyásolja lényegesen a termék aminosav-tartalmát. 5 . 5. példa A mikroorganizmusok arányának meghatározása a JMS 72 jelű vegyes tenyészetben, folyamatos tenyésztés esetén 10 A JMS 72 jelű vegyes tenyészetet a 2. példában leírt módon folyamatosan tenyésztjük. A tenyészetből időről időre mintát veszünk, a mintákat lemezen tenyésztjük, és így meghatározzuk az egyes hígítási arányokhoz tartozó mikroorganizmus-telepszámokat. 15 A tenyészet mintáit közvetlenül a fermentorból különítjük el, steril vizes 0,85%K>S nátrium-klorid-oldattal 10~6 , 10~ 7 , illetve 10~ 8 -szorosra hígítjuk, ésO,1 ml így kapott mintát szárított kettős Lab Lemco lemezek felületére permetezünk. A lemezeket 48 órán 20 át 42 Cc -on inkubáljuk, majd megszámláljuk az egyes típusokba tartozó telepeket. Az eredményeket a 7. táblázatban közöljük. 7. táblázat Hígítási arány l/óra FG Telepszám MU YL EN EN aránya a teljes tenyészetben, % 0,06 0,10 0,20 0,30 0,40 0,50 0,55 15 5 5 4 3 3 2 22 17 13 8 5 4 3 25 21 15 12 10 750 740 600 580 570 600 600 92,4 94,5 94,8 96,0 96,9 97,6 99,2 A 7. táblázat adataiból látható, hogy minden esetben a termelődött biomassza főtömegében a metanolt hasznosító ENjelű mikroorganizmusból áll. A metanolt nem liasznosító mikroorganizmusok teljes tenyészethez viszonyított %-os aránya a hígítási aránytól függően körülbelül 0,8 és 7,6% között változik. 6. példa JMS 72 jelű vegyes tenyészet folyamatos tenyésztése gyors beindítással A kísérletben a következő összetételű táptalajt használjuk fel: Na2 HP0 4 3,0 8/1 KH2 P0 4 3,0 g/l (NH4 ) 2 S0 4 20,0 g/l MgS04 -7H 2 0 0,75 g/l FeCl3 -6H 2 0 0,167 g/l CaCl2 -H 2 0 ' 5,3 mg/l ZnS04 -7H 2 0 1,4 mg/l CuS04 -5H 2 0 1,3 mg/l 45 50 55 60 65 MnS04 -4H 2 0 1,2 mg/l CoCU-6H2 0 1,4 mg/l H3BO3 0,8 mg/1 Na2 Mo0 4 -2H 2 0 2.4 mg/l metanol 80 g/l VÍZ ad 1 liter 7 literes fermentorba 4,2 liter fenti összetételű táptalajt töltünk, majd a táptalajt JMS 72 jelű tenyészettel oltjuk be. Ezután a 803 018 sz. belga szabadalmi leírásban ismertetett módon beindítjuk a fermentációt, és 16 g/l értékre növeljük a száraz sejtanyag-koncentrációt. A metanol koncentrációját szakaszosan, 1,0 g/l-es részletenként addig növeljük, amíg 25 g/l vagy annál nagyobb száraz sejtanyagkoncentrációt nem érünk el. A kísérlet során a következő körülményeket tartjuk fenn: hőmérséklet: 42 C° pH = 6,6 (káliumhidroxiddal szabályozva) keverési sebesség: 1500 fordulat/perc levegőztetési sebesség: 5 liter/perc hígítási arány: 0,07-0,3/óra A kísérlet eredményeit a 8. táblázatban közöljük. 7
