170225. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pepszinosztreptin proteáz- inhibitorok előállítására
170225 17 18 gátló szert, majd az inokulált táptalajt levegőztetés és keverés közben 28 C°-on tenyésztjük. Az indulás után 16 órával hozzáadunk 3000 térfogatrész 15%-os vizes propionsav-oldatot és a táptalajt további 50 órán keresztül inkubáljuk, így körülbelül 33 000 térfogatrész táptalajt kapunk. Ezt szűrőprésen szűrjük és a szűrletet etüacetállal mossuk. Az etilacetátos fázis elválasztása után a vizes fázist 25 000 térfogatrészre betöményítjük, pH-ját körülbelül 4,5-re beállítjuk, majd aktív szén oszlopra visszük fel. Az oszlopot vízzel és 40%-os vizes metanollal mossuk, majd az aktív frakciót eluáljuk. Az eluátumot betöményítve körülbelül 5 súlyrész port kapunk, amelyet vízben feloldunk és szilikagél oszlopra visszük fel, majd az I és II aktív frakciókat az oszlopról etilacetát-metanol (5:1) eleggyel eluáljuk. Az I aktív frakciót az etil-acetát és metanol elpárolog-10 15 tatásával betöményítjük és szilikagélen kromatografáljuk, oldószerrendszerként n-butanol-ecetsav-víz-butilacetát (30:1:1:30) elegyet alkalmazva. Az így tisztított II aktív frakciót újra felvisszük aktív szén oszlopra. Az oszlopot 50%-os vizes metanollal mossuk és az eluátumot szárazra pároljuk. A koncentrátumot kis mennyiségű metanolban feloldjuk és állni hagyjuk, így 0,09 súlyrész terméket kapunk fehér színű tűk alakjában. Ha a II aktív frakciót az I frakcióhoz hasonlóan kezeljük, körülbelül 0,32 súlyrész termék válik ki fehér színű tűk alakjában. Ez a két kristályos termék P-pepszinosztreptinmetilészter és P-pepszinosztreptin, amint ezt elemzési eredményük, olvadáspontjuk, aminosav-összetételük, tömegspektrumuk stb. bizonyítja. larasa Szabadalmi igénypontok A CH3 CH 3 CH3 CH 3 CH 3 CH 3 CH \/ \/ I CH CH CH2 OH CH3 CH 3 CH R1 CH CH CH2 OH CH3 CH2 OH 0-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CH-CH2 -CO-NH-CH-CO-NH-CH-CH-CH 2 -COOR 2 általános képletű proteáz-inhibitor előállítására — ahol a képletben R1 jelentése etil- vagy izopropilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport -, azzal jellemezve, hogy Ferm-P 393 szám alatt letétbe helyezett Streptomyces citricolor, IFO 12 812 szám alatt letétbe helyezett Streptomyces ramulosus vagy IFO 12 848 szám alatt letétbe helyezett Streptomyces catenulae mikroorganizmust asszimilálható szénfonást és emészthető nitrogénforrást tartalmazó táptalajban aerob körülmények között tenyésztünk, majd az inhibitort kinyerjük a táptalajból. (Elsőbbsége: 1973. IV. 6.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a) olyan I általános képletű proteáz-inhibitor előállítására, ahol a képletben R1 jelentése izopropilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom, azzal jellemezve, hogy Ferm-P 393 szám alatt letétbe helyezett Streptomyces citricolor, IFO 12 812 szám alatt letétbe helyezett Sreptomyces ramulosus vagy IFO 12 848 szám alatt letétbe helyezett Streptomyces catenulae mikroorganizmust asszimilálható szénforrást és emészthető nitrogénforrást, előnyösen valint, a valin N-acetil vagy N-benzoil-származékát és/vagy izovajsavat vagy propionsavat is tartalmazó táptalajban aerob körülmények között tenyésztünk, majd az inhibitort kinyerjük a táptalajból, vagy b) olyan I általános képletű proteáz-inhibitor előállítására, ahol a képletben R jelentése jzopropil-csoport és R2 jelentése metilcsoport, azzal jellemezve, hogy Ferm-P 393 szám alatt letétbe helyezett Streptomyces citricolor mikroorganizmust asszimilálható szénforrást és emészthető nitrogénforrást, 35 előnyösen valint, a valin N-acetil- vagy N-benzoilszármazékát és/vagy izovajsavat vagy propionsavat is tartalmazó táptalajban aerob körülmények között tenyésztünk, majd az inhibitort kinyerjük a táptalajból. (Elsőbbsége: 1972. IV. 7.) 40 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a) olyan I általános képletű proteáz-inhibitor előállítására, ahol a képletben R jelentése etilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom, azzal jellemezve, hogy 45 Ferm-P 393 szám alatt letétbe helyezett Streptomyces citricolor, IFO 12 812 szám alatt letétbe helyezett Streptomyces ramulosus vagy IFO 12 848 szám alatt letétbe helyezett Streptomyces catenulae mikroorganizmust asszimilálható szén-50 fonást és emészthető nitrogénfonást, előnyösen valint, a valin N-acetil- vagy N-benzoil-származékát és (vagy izovajsavat is tartalmazó táptalajban aerob körülmények között tenyésztünk, majd az inhibitort kinyerjük a táptalajból, vagy 55 b) olyan I általános képletű proteáz-inhibitor előállítására, ahol a képletben R jelentése etilcsoport és R2 jelentése metilcsoport, azzal jellemezve, hogy Ferm-P 393 szám alatt letétbe helyezett Streptomyces citricolor mikroorganizmust asszimilálható 60 szénforrást és emészthető, nitrogénforrást, előnyösen valint, a valin N-acetil- vagy N-benzoil-származékát és/vagy izovajsavat is tartalmazó táptalajban aerob körülmények között tenyésztünk, majd az inhibitort kinyerjük a táptalajból. (Elsőbbsége: 65 1972. Vn. 7.) 9
