170135. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vinkadiolin kinyerésére és tisztítására

5 170135 6 kat azonosltunk. A nyers dimer alkaloidok három 5o g-os mennyiségét /a nyers alkaloidkeverék szulfátsóiból kapott szabad bázisokat/ kromatografáljuk a fenti oszlopon és egymás után az ismert dimer alkaloidokat eluáljuk. A három kromatográfiásai visszamaradt polárisabb dimer alkaloidokat metanollal eluáljuk. Körülbelül 3,38 g nyers poláris dimer alkaloidot kapunk. Ezeket a nyers alkaloidokat 3,5 kg aluminium-oxidon /III-IV.aktivitás/ 2,5x730 cm-es oszlopon újra kromatografáljuk, mozgó fázisként etil-acetát/viz /98:1,8/ elegyet használva. Az aluminium-oxid és az oszlopra felvitt alkaloid aránya körülbelül looo:l és a kromatográfiai körülbelül 61,2 atm nyomáson hajtjuk végre. Az igy kapott, 297 mg sulyu negyedik frakció főkomponensként vinkadiolint tartalmaz. Az eluenst bepárolva és a maradékot éterből átkristályositva tiszta vinkadiolint kapunk, melynek olvadáspontja 218-220,5 C° /bomlás/. 2. példa lo kg Vinca rosea levelet háromszor l-l órán át extrahálunk, extrahálószerként 32-szeres térfogatú, 5o C hőmérsékletű vizet használva, melyet 3o ít-os kénsavval pH=3,o értékre állítottunk. A vizes extraktumot dekantáljuk, egyesitjük és szűrjük. A szürletet kétszer azonos térfogatú benzollal extraháljuk, majd a benzolos extraktumokat elöntjük. A szürlet pH-értékét ezután tömény ammóniumhidroxidoldat hozzáadásával 6,o értékre emeljük. A vizes fázist ezen a pH-értéken háromszor azonos térfogatú benzollal extraháljuk. A benzolos extraktumokat egyesitjük és vákuumban bepárolva 57 g nyers alkaloidelegyet /VRA/ kapunk. 3. példa loo mg/ml koncentrációjú vizes vinkadiolin-szulfát oldat l-l ml-ét lo ml-es ampullákba töltjük, majd az ampullákat liofilizáljuk és sterilen gumikupakkal lezárjuk. Ily módon lo mg hatóanyagot tartalmazó ampullákat állítunk elő, mely használat előtt steril vizzes vagy fiziológiás sóoldattal hígítandó. Az igy készitett oldatot intravénásán adagoljuk. A vinkadiolin sejtosztódást gátló anyag, 10 15 20 25 30 35 mely hatásosan alkalmazható daganatgátló szerként. Sejtkulturákhoz adva a sejtciklus oszlási fázisát leállitja, anélkül, hogy a sejtciklus többi fázisára hatna. A Yinca rosea-ból nyert legtöbb ismert tumorgátló hatású indol-dihidroindol /dimer/ alkaloid metafázisblokkoló hatással rendelkezik, beleértve a vinkaleukoblastint /VLB/, vinkristint és leurosint. Monomer vinka alkaloidoknak nincs metafázisblokkoló hatásuk és nem mitózismérgek. A vinkadiolin 2.1o~ --2.1o~4 mcg/ml koncentrációtartományban fejti ki metafázisblokkoló hatását, hasonlóan a VLB-hez és vinkristlnhez. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az I képletü vinkadiolin és szulfátja előállítására és tisztítására, mely vegyületeket ugy állítjuk elő, hogy az alkaloidot Vinca rosea leveleiből vizes savas vagy bázisos extrakcióval kinyerjük, előnyösen benzollal tisztítjuk, a dimer alkaloidokat az extraktumből pH 6,ó értéken benzollal extraháljuk, és az ismert dimer indolalkaloidokat nagynyomású kromatográfiával gélről eluáljuk, azzal jellemezve, hogy /!/ az alkaloid-keverékben visszamaradt alkaloidokat lo és 61,5 atm közötti nyomáson kromatografáljuk, eluensként előnyösen etilacetát-metilénklorid-viz 25:75:0,4 arányú oldószer-elegyet használunk, /2/ a tiszta vinkadiolint tartalmazó eluátum frakciókat elválasztjuk, /3/ az eluenst lepároljuk, és /4/ kivánt esetben a vinkadiolint szulfátjává alakitjuk át. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás továbbfejlesztése tumorgátlő hatású gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az I képletü vinkadiolint vagy szulfátját gyógyászati készítmények előállításánál általánosan használt hordozóanyagokkal keverve szokásos dőzisformává, előnyösen oldat, injekció, szuszpenziő, stb. alakra dolgozzuk fel. 1 lap rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 770222, OTH, Budapest