170110. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai eszköz glükóz vizeletben való kimutatására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1975.111.28. (BO-1545) Elsőbbsége: Német Szövetségi Köztársaság 1974.111.29. (P 24 15 257.6) Közzététel napja: 1976. XI.27. Megjelent: 1977.XI.15. 170110 Nemzetközi osztályozás: G 01 N 31/22 G 01 N 33/16 Feltaláló: di. Tiedemann Hugo, biokémikus, Mannheim-Wallstadt, dr. Sojka Bernward, vegyész, Viernheim, Lange Hans, vegyésztechnikus, Lampertheim, dr. Rey Hans-Georg, gyógyszerész, dr. Rieckmann Peter, gyógyszerész, Mannheim-Waldhof, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Boehringer Mannheim GmbH., Mannheim-Waldhof, Német Szövetségi Köztársaság Diagnosztikai eszköz glükóz vizeletben való kimutatására A glükóz vizeletben való kimutatása nagy jelentőségű a cukorbetegség megállapítása és a folyamat ellenőrzése szempontjából. Ezért a szabadalmi irodalomban számos úgynevezett gyorsprőbát irnak le, melyek közül némelyik kereskedelmi forgalomban van. E próbák alapját csaknem kizárólag a következő elv képezi: a glükóz oxigénnel gltikóz-oxidáz jelenlétében glükonsavvá és hidrogén-peroxiddá oxidálódik, az utóbbi pedig peroxidáz jelenlétében indikátorokat szines vegyületekké oxidál. Bár számos ilyen indikátort leirtak, mégis túlnyomórészt az o-toluidin használatos. Az ilyen glükóz-teszteket általában 4-7 pH-tartományban hajtják végre, amely szokásos pufferekkel, mint foszfát-, citrát-pufférrel és hasonlókkal állítható be. Mégis csaknem kizárólag az 5 pH-értéket részesitik előnyben, mivel ezen a pH-n az érzékenység és az átcsapás optimális /lásd például a 3,o5o,373 és 2,848,3o8 számú Amerikai E-gyesült Államok-beli és az l,598,8o9 számú MSZK-beli szabadalmi leírást/. Az ilyen pH-ju tesztpapirok azonban azzal a komoly hátránnyal rendelkeznek, hogy a reakcióban kialakuló szin úgynevezett diabetikus ketoacidózls esetében gyengébb, vagy esetleg létre sem jön. Ketoacidózisnál a vizeletben nagyobb mennyiségű acetecetsav és hidroxi-vajsav jelenik meg, melyek zavarják a pH 5-ös pufferrel impregnált tesztpapirok reakcióját. A ketoacidózis főleg diabetesnél lép fel, de más betegségek és éhezéses állapotok is előidézhetik. A diabetikus ketoacidózlst csak a 10 15 20 25 30 35 glükóz vizeletben való egyidejű megjelenése különbözteti meg az egyéb ketoacidőzisoktől. Ezért ketoacidózis által zavart glükóz-gyorspróba sem a ketoacidózis differenciáldiagnosztikája, sem a diabetes diagnózisa és kontrollja szempontjából nem alkalmas. Kísérleteink azt mutatták, hogy ha a glükóz-tesztpapirok pH-értékét 5,8-6,2-ig, előnyösen 6,o-ig növeljük, a ketoacidózis zavaró hatása csökkenthető. Szokásos.puffert használva azonban a szinreakció átcsapása erősen romlik, anélkül, hogy a zavaró hatás minden esetben kiküszöbölhető lenne. Ezenfelül a tesztpapirok tartóssága sok esetben kívánni valót hagy maga után. Meglepő módon azt találtuk, hogy érzékeny, gyorsan és éles átmenettel reagáló, ketoacidózistől nem befolyásolt glükóztesztpapirok állíthatók elő, ha pufferként 2-/N-morfolino/-etánszulfonsavat /HES/ használunk. Ezek a papirok huzamosabb ideig magas hőmérsékletnek kitéve is teljesen stabilak, ami különösen jelentős a trópusokon való felhasználhatóság szempontjából. A 2-/N-morfolino/-etánszulfonsav ismert puffer, melyet Good /~Biochemistry5, 467 /1966,/J biológiai rendszereken végzett munkákhoz vezetett be, de kizárólag folyékony fázisban és nem szilárd reagens-készitmények, mint tesztpapirok számára. E speciális puffer meglepő hatása azért volt váratlan, mivel más, biológiai rendszerekben használatos pufferek, mint például az úgynevezett tris-puffer /tris-/hidroxi-metil/-amino-metán/, nem mutatnak a MES-hez hasonló hatást /lásd a következő 1. táblázatot/. 170110