170102. lajstromszámú szabadalom • Eljáráw sztreptokináz fermentáció útján való előállítására
3 170102 4 sztreptokináz biológiai hozama 3-4-szeresére ni. A következő példák a Streptococcus equlsimilis IMET B 377 törzs 1. és 2. előkulturá-3a, valamint a főtenyészet előállítását ismertetik. A találmány alkalmazható egyéb fermentlé-előállitási illetve tenyésztési technikák esetén is, ahol sztreptokináz kinyerése a cél. 1. példa 1. és 2« előtenyésztési szakasz Tápoldatot készítünk húsból vagy halból nyert 2o g/l pankreatikus peptonból ezen olyan hus- vagy halpeptont értünk, amelyet pankreász fermenttel, tripszinnel való lebontás utján kapunk/, 5 g/l NaCl-ből, 2 # marhavérszérumból vagy élesztőautolizátumból. Annyi élesztőautolizátumot alkalmazunk, hogy a táptalaj o,2 # K-t tartalmazzon. /Az élesztőautolizátum N-tartalma változó, és ezért az alkalmazás előtt minden esetben meg kell azt határozni. Az N-tartalomtól függően olyan menynyiségü élesztőautolizátumot alkalmazunk, hogy a táptalaj N-tartalma o,l-o,8 # között legyen./ A táptalajt 2oo ml-es Erlenmeyer-lombikba töltjük, sterilizáljuk és fiziológiás konyhasóoldattal készitett lo ml Streptococcus equisimilis /deponálva a Mikrobiológiai és Kisérleti Terápiai Központi Intézet Orvosi Mikrobiológiai Osztályának, Jéna, Német Demokratikus Köztársaság, törzsgyüjteményében IMET B 377 szám alatt/ szuszpenzióval beoltjuk. A Streptococcus szuszpenziót liofilizált soványtej-konzervből nyerjük. 16 órán át 37 °C-on történő tenyésztést követően az igy kapott 1. előtenyészetből /állótenyészet/ 2o-2o ml-t 2ooo ml tápközeget /2. elŐtenyészet/ tartalmazó kevertetett edényekbe átoltunk vagy mint inokulumot a főtenyészethez használjuk fel. A tápoldat élesztőautolizátum alakjában o,2 f, N-t valamint a szokásos sókat /KH2P0 4 , K2 HP0 4 , CH^COONa, 3 HoO, NaHCO*, MgS04 . 7 H2 0, FeS0 4 -/NH 4 / 2 S0 4 , MnCT 2 -4 H2 0/ tartalmazza. A tenyésztést legkorábban a logaritmikus növekedési fázis kezdetéig, legkésőbb a végéig, azonban célszerűen a közepéig /közel 18 óra/ 28 °C-on végezzük. Amennyibén 37 °C-on dolgozunk, a tenyésztés időtartama csupán közel 7 óra. A 2. előtenyészet előnyösen alkalmazható oltóanyagként a következő főtenyészethez, minthogy aktiv szaporodási fázisában tartalmazza a Streptococcus equisimilis IMET B 377 mikroorganizmust, és igy az utóbbinak a további szaporodása azonnal megindul. 2. példa Főtenyészet A rőtenyészethez használt tápoldat az alábbi összetételű: 15-12o g/l táptalaj mennyiségű élesztőautolizátum, ami a táptalajban o,l-o,8 #, előnyösen o,2-o,4 1í-os N-tartalomnak felel meg, továbbá KH2 P0 4 KoHPOl CÍUCOONa • NaHC03 MgS04 • 7HoO > Fe SO* • /NH4/ 2 S0 4 4H2 Ö 3H2 0 /tiszta/ MnCl glük 2* ez 2,5o g/l táptalaj 2,5o g/l l,oo g/l l,oo g/l o,4o g/l " o,o2 g/l " o,o2 g/l lo.oo g/l A sóoldatot és az élesztőautolizátumot egységes oldat formájában vagy külön-külön sterilizálhatjuk. Az élesztőautolizátumot sterilre is szűrhetjük. Ezután a táptalajhoz sterilizált glükőzoldatot adunk. A táptalajt fermentorba töltjük, majd a /tankban levő/ táptalajt súlyára vonatkoztatva l:loo térfogatrész arányban az 1. vagy 2. előtenyészettel beoltjuk. Előnyösen olyan 2. előtenyészetet /keveréssel készitett előtenyészet/ használunk, amely a hőmérséklettől függően célszerűen a logaritmikus szaporodác si fázisban van. ° A tenyésztést 28 C hőmérsékleten loo-3oo fordulat/perc sebességű keverés mellett végezzük. A pH-értéket automatikusan 7,2-7,4 értéken tartjuk. A 2. előtenyészettel végzett oltás esetén a tenyésztési idő 2o-24 óra, az 1. előtenyé-10 szettel végzett oltás esetén 24-28 óra között van. 35 °C hőmérsékleten a tenyésztési időtartam 12-16 órára csökken. A 2. tenyészettel végzett oltás esetén a sztreptokináz hozam 28 °C-on legfeljebb 14ooo sztreptokináz-egység/ml fermentlé.. •5 Az oltóanyag tenyésztését az 1. példában leirt módon végezzük. A főtenyészet táptalajához N-forrásként 35-28o ml/l táptalaj menynyiségben kukoricalekvárt adunk, amely ä táptalajban o,l-o,8 5í, előnyösen o,2-o,4 % N-tartalomnak felel meg. A kukoricalekvár szá-20 razanyag-tartalma a mindenkor felhasznált tételtől függ és átlagosan 3o-4o # között mozog. A sóoldat a 2. példában leirt sóoldattal azonos összetételű. A 2. példa szerinti pH-értéket betartva és az ott leirt tenyésztési módot követve az 1. előtenyészettel való ol„,- tás eredményeként a hozam kb. 45oo sztrep" tokináz-egység/ml fermentlé, a 2. előtenyészettel való oltás esetén a hozam 8ooo sztreptokináz-egység/ml fermentlé. A sztreptokináz értékét módosított plazmolizis-teszttel mérjük az alábbi irodalom szerinti 30 F. Markwardt, H.P. Klöcking és M.Richter, Pharmazie 22 /1967/, 83. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás sztreptokináz fermentációs utón 35 való előállítására azzal jellemezve, hogy a Streptococcus equisimilis IMET B 377 törzset /deponálva a Mikrobiológiai és Kisérleti Terápiai Központi Intézet Orvosi Mikrobiológiai Osztályának, Jéna, Német Demokratikus Köztársaság, törzsgyüjteményében/ N-forrásként élesztőautolizátumot és/vagy kukoricalekvárt tartalmazó, előnyösen o, 1-0,8 # N-tartalmu táptalajon, előnyösen 7,o-7,5 pH-értéken három lépésben, egy első, egy második előtenyészetben és egy főtenyészetben tenyésztjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás fogana-45 tositási módja, azzal jellemezve, hogy a tenyésztést o,2-o,4 i> N-tartalmu táptalajon végezzük. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy a tenyésztést 7,2-7,4 pH-értéken végezzük. 50 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy az élesztőautolizátumot és a kukoricalekvárt egymással elegyítve alkalmazzuk. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti 55 eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy az élesztőautolizátumot és/vagy a kukoricalekvárt valamely önmagában ismert és a sztreptokináz előállításához használatos táptalajhoz adagoljuk. 40 A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 770172. OTH, Budapest
