170102. lajstromszámú szabadalom • Eljáráw sztreptokináz fermentáció útján való előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1974.XI.25. (AE-^34) Elsőbbsége: Német Demokratikus Köztársaság 1973. XI.26. (WP C 12 d/174 985) Közzététel napja:1976.XI.27. ent: 1977.XI.15. 170102 Nemzetközi osztályozás: C 12 D 13/00 C 12 D 13/10 Feltaláló:dr. Baerwald Gerhard, oki. biológus, Drezda, Mayer Günter, oki. biológus, Radebeul, Heikel Robert, oki. vegyész, Volzke Klaus-Dieter, oki. biológus, Röhlig Rosemarie, orvosi asszisztens, Decker Karl-Ludwig, oki. jogász, Drezda, prof. dr.dr. Köhler Werner, orvos, dr. Gerlach Dieter, oki. vegyész, Jena, Német Demokratikus Köztársaság Tulajdonos: VEB Arzneimittelwerk Dresden, Radebeul, Német Demokratikus Köztársaság Eljárás sztreptokináz fermentáció útján való előállítására 1 A találmány tárgya biológiai /fermentációs/ eljárás Streptocoecusok tenyésztésére sztreptokináz előállítása céljából. Az eljárás jellemzője, hogy a Streptococcus equisimilis IMET B 377 törzset /deponálva a Mikrobiológiai és Kísérleti Terápiai Központi 5 Intézet Orvosi Mikrobiológiai Osztályának törzsgyttjteményében, Jéna, Német Demokratikus Köztársaság/ N-forrásként élesztőautolizátumot és/vagy kukoricalekvárt tartalmazó, előnyösen o,l-o,8 5í N-tartalmu táptalajon, előnyösen 7,o-7,5 pH-értéken három lépésben, egy első, egy második '0 előtenyészetben és egy főtenyészetben tenyésztjük. A sztreptokináz, amely a -hemolizáló Streptococcus anyagcsereterméke, egy pirogénmentes, nagytisztaságu anyagcseretermék, továbbá igen értékes terápiás készítmény. E készítmény fő indikációs területei a következők: friss miokardiálls infarktus, a végtagok akut artériás elzáródásai, friss vénás trombózis, tüdőembólia, stb. A sztreptokináz hemolizáló Streptocoecusok fermentációja utján történő előállítására számos eljárás ismert. Az ismert eljárások bonyolult összetételű és ennélfogva költséges tápoldatok felhasználásán alapulnak, továbbá közös hátrányuk, hogy a sztreptokináz hozama viszonylag csekély. A 3 o46 2oo számú Amerikai Egyesült Államok' béli szabadalmi leírás például enzimes hidrolizált kazein alapú táptalajt ismertet, amely aminosavakat, vitaminokat valamint sókat tártai» maz. Az eljárás azonban csupán 35oo-353o sztreptokináz-egység/ml fermentlé hozamot eredményez. 30 /Egy enzimegységen azt a sztreptokináz mennyiséget értjük, amely lo perc alatt feloldja a véralvadékot az alábbi irodalomban ismertetett körülmények között: Christensen: J. Clin.Invest. 28, /1949/, 163-172 old./ A 923 453, valamint a .924 562 számú NSZK-beliS 15 20 25 szabadalmi leírásokban szintén bonyolult összetételű tápoldatokat javasolnak. E tápoldat öszszetétele a következő: hidrolizált kazein, KHgPO^., oisztin, glicin, dextróz, uracil, adeninszulfat, nikotinsav, piridoxin, triptofán, Ca-pantotenát, tiamin, riboflavin, tioglikolsav, valamint nyomelemek sóoldatai. Ettől függetlenül a hozam szintén alacsony: 117o-22oo sztreptokináz-egység/ml fermentlé. A 4o4 591 sz. svájci szabadalmi leirás szerint a beoltáshoz olyan előtenyéazetet alkalmaznak, amely a sztreptokináz termelés-előtenyészet tenyésztési idő diagram maximumába esik. A kitermelés azonban csak 620E/ml tenyészfolyadék. A 4o7 924 sz. svájci szabadalmi leirás szerint a fermentálás során nem-ionogén, felületaktív anyagot tudnak a tenyészfolyadékhoz, mégis csak 250E/ml körüli biológiai értékeket érnek el. A találmány célja a fenti hátrányok kiküszöbölésére olyan eljárás kifejlesztése sztreptokináz fermentativ előállítására, amely lehetővé teszi egyszerű összetételű és ennélfogva nem költséges tápközeg felhasználása mellett nagy sztreptokináz hozam elérését. Meglepő módon azt találtuk, hogy kiküszöbölhető a már ismertetett, bonyolult Összetételű és költséges tápoldatok alkalmazása és ezenkívül nagy sztreptokináz hozam érhető el, ha a Streptococcus equisimilis IMET B 377 törzset az ismert táptalaj-komponensek, mint sók és cukrok mellett N-forrásként élesztőautolizátumot és/vagy kukoricalekvást tartalmazó táptalajon tenyésztjük. A találmány értelmében annyi élesztőautolizátumot illetve kukoricalekvárt használunk, hogy a táptalaj N-tartalma o,l-o,8 5C, előnyösen o,2-o,4 # legyen. A találmány előnye egyrészt az, hogy egyszerű összetételű és ennélfogva olcsó tápanyagoldatot alkalmazunk, másrészt, hogy a 170102