170093. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás L-lizin előállítására

7 170093 8 térfogat % mennyiségben munkafermentorba visz szűk. A fermentor az alábbi összetételű, előzőleg sterilizált fermentációs táptalajt tartalmazza: répamelasz ásványolaj eredetű szénhidrogéneken tenyésztett Candida tropicalis hidrolizátuma 3,2 kg /melasz szénhidráttartalma 5o súly %/ 1 liter /loo g,száraz kiindulási élesztőre számitva/ 36o g, ammóniumklorid lecsapott kálciumkarbonát 24o g, csapviz 12 liter térfogatig, táptalaj pH-értéke 7,1-7,3. A Candida tropicalis hidrolizátumát az alábbi módon állitottuk elő. loo g száraz élesztőt 7oo ml 6 n kénsavban szuszpendáltunk. A hidrolízist 3 órán át végeztük autoklávban 131-132 C hőmérsékleten. Ezután a hidrolizátumot szobahőmérsékletre jutottuk, és vizes báriumhidroxid-szuszpenzióval addig semlegesítettük, amig a pH el nem érte a 7,1-7,3 értéket. A lecsapódott báriumszulfátot kiszűrtük és a szürletet használtuk fel a fermentációs táptalaj alkotórészekéit. A törzset a 4. példában leirt körülmények között termeljük a megadott összetételű táptalajon. 48 óra múlva a folyékony kultúra 5o,3 g/liter L-lizint tartalmaz /L-lizin-monoklórhidrátban kifejezve/, ami a fermentációs táptalaj kezdeti szénhidrát-tartalmára vonatkoztatva 38,7 #-nak felel meg. A kultúra nem tartalmaz egyéb aminosavat. Az L-lizint az 1.példa szerinti módon különitjük el a folyékony kultúrából. 6. példa L-lizin bioszintéziséhez homoszerin-hiányos Brevibacterium sp 22 törzset használunk /deponálva B-82o számon a WNIISENETIKA Intézetben/. Az inokulum tenyésztésének, a törzs inokulálásának /fermentációs táptalaj, levegőztetés intenzitása, hőmérséklet/ és az L-lizin elkülönítésének a körülményei megegyeznek az 1.példában megadott körülményekkel. 86 óra múlva a folyékony kultúra 28,4 g/liter L-lizint tartalmaz /L-lizin-mnnoklórhidrátban kifejezve/, ez a fermentációs táptalaj kezdeti szénhidráttartalmára vonatkoztatva 24,6 %nak felel meg. 7. Példa L-llzin bioszintéziséhez homoszerin-, izoleucin- és valin-hiányos Micrococcus glutamicus T-3 törzset használunk. Az inokulumot az 1.példában leirt módon tenyésztjük, majd a bioszintézishez 2 térfogat^ mennyiségben munkafermentorba visszük át. A fermentor az alábbi összetételű, előzőleg sterilizált fermentációs táptalajt tartalmazza 10 15 kezdve az eljárás befejezéséig a tenyésztést looo fordulat/perc keverési sebesség és 4,8 g 02/liter/őra levegőztetési sebesség mellett folytatjuk 33-35 C°-on. A fermentorba az eljárás egész ideje alatt 1 térfogatrész fermentációs táptalajra számitva percenként 1 térfogatrész levegőt vezetünk be. 74 óra múlva a folyékony kultúra 4o,4 g/liter L-lizint tartalmaz /L-lizin-monoklÓrhidrátban kifejezve/, ami a fermentációs táptalaj kezdeti szénhidráttartalmára vonatkoztatva 3o #-nak felel meg. A folyékony kultúra nem tartalmaz egyéb aminosavakat. 8. példa L-lizin előállításához homoszerin-, izoleucin- és valin-hiányos Micrococcus glutamicus T-3 törzset használunk. Az inokulumot az 1.példa szerinti módon tenyésztjük, majd az L-lizin bioszintéziséhez 3 térfogat^ mennyiségben munkafermentorba viszszük át. A fermentor az alábbi összetételű, előzőleg sterilizált fermentációs táptalajt tartalmazza: répamelasz 20 25 30 35 40 45 répamelasz ásványolaj eredetű szénhidrogéneken tenyésztett Candida guilermondii hidrolizátuma ammóniumklorid csapviz a táptalaj pH-értéke 3 kg /melasz szénhidráttartalma 5o suly5í/ 1,1 liter /12o g,szá- 50 raz kiindulási élesztőre számitva/, 316 g, 1-2 liter térfogatig, 7,1-7,3 A Candida guilermondii hidrolizátumát az alábbi módon állitottuk elő. 12o g száraz élesztőt 7oo ml 8 n sósavban szuszpendáltunk. A hidrolízist autoklávban 3 órán át végeztük 13o-132 C hőmérsékleten. Ezután a hidrolizátumot szobahőmérsékletre hűtöttük, és 4oo ml 25 $-os vizes ammóniumhidroxid-oldattal 7,1-7,3 pH-érték -eléréséig semlegesítettük, eközben megkaptuk a táptalaj második alkotórészét, a megadott menynyiségü ammóniumkloridot. A semlegesített hidrolizátumot használjuk fel a fermentációs táptalaj elkészítéséhez. A törzset a megadott összetételű táptalajon az első napon 7oo fordulat/perc keverési sebesség és 3 g Op/Hter/éra levegőztetési sebesség mellett tenyésztjük 28-3o C°-on. A 2.naptól 55 60 65 ásványolaj eredetű szénhidrogéneken tenyésztett Candida tropicalis hidrolizátuma kg /melasz szénhidráttartalma 5o suly#/ 1,8 liter /24o g,száraz kiindulási élesztőre számitva/ 316 g, 12 liter térfogatig 7,1-7,3. ammóniumklorid csapviz a táptalaj pH-értéke A Candida tropicalis hidrolizátumát az alábbi módon állitottuk elő. 400 g száraz élesztőt 3 liter vizben szuszpendáltunk, majd Asp.oryzeból elkülönített litikus enzimet, éspedig 6,4 g "Amilorisin lox" jelű készítményt /előállítását lásd a korábban említett disszertációban/ adtunk hozzá és hidrolizáltuk az élesztősejtfalakat és -fehérjéket. A fermentációs hidrolízist lo órán át folytattuk 45 C°-on és 5,0 pH-értéken. Ezután a hidrolizátumot sósavval megsavanyitottuk, amíg a 3,8-4,0 pH-érték be nem állt, majd 6o-7o C°-ra melegítettük. E közben képződött csapadékot szűréssel elválasztottuk, és a sztirletet használtuk fel a fermentációs táptalaj alkotórészeként. A törzset a 7.példa szerinti módon tenyésztettük a fenti összetételű táptalajon. 72 óra múlva a folyékony kultúra 17,8 g/li ter L-lizint tartalmaz /L-lizin-monoklórhidrátban kifejezve/, ez a fermentációs táptalaj kezdeti szénhidráttartalmára vonatkoztatva 22,3 %nak felel meg. A folyékony kultúra nem tartalmaz egyéb aminosavakat. 9. példa L-lizin előállításához homoszerin-, izoleucin- és valin-hiányos Micrococcus glutamicus T-3 törzset használunk. Az inokulumot az 1.példában leirt módon tenyésztjük, majd az L-lizin bioszintéziséhez 2 térfogat^ mennyiségben munkafermentorba visszük át. A fermentor az alábbi összetételű, előzőleg sterilizált táptalajt tartalmazza: répamelasz 3 kg /melasz szénhidráttartalma, 5o suly#/, ásványolaj eredetű szénhidrogéneken tenyésztett Candida tropicalis hidrolizátum 1 liter /loo g, száraz kiindulási élesztőre számitva/, karbamid 15o g, csapviz 12 liter térfogatig a táptalaj pH-értéke 7,1-7,3. A Candida tropicalis hidrolizátumát az alábbi módon állitottuk elő. loo g száraz élesztőt 7oo ml 6 n kénsavban szuszpendáltunk. A hidrolízist autoklávban 3 órán keresztül végeztük 131-132 C° hőmérsékleten. A hidrolizátumot szobahőmérsékletre hűtöttük, és vizes báriumhidroxid-szuszpenzióval 7,1-7,3 pH-érték eléréséig semlegesítettük. A levált báriumszulfát csapadékot kiszűrtük, és a szürletet használtuk fel a fermentációs táptalaj alkotórészeként.