169972. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hordozóhoz kötött fehérje előállítására

169972 1. táblázat ä «I Aktivitás: - E/g liofi-2 lizátum -0H Kapcsolóvegyület (KV) 1-Allil-oxi-3<N--etilén-imin)-propanol-2 Maleinsav-anhidrid Allilbromid Akriloilklorid Maleinsavhidrazid 3-6 Glükózoxidáz KV-tel KV nélkül 360 110 110 70 260 110 240 110 7,8 Tripszin KV-tel KV nélkül 6 0,6 7,8 0,5 9,10 Kimotripszin KV-tel KV nélkül 3,0 0,1 0,5 0,1 11 Uríkáz KV-tel KV nélkül 5,5 3,5 12 Hexokináz KV-tel KV nélkül 40 20 13. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, fehérjeként hexokinázt használva. A polimerizációs rendszer keményítőből előállított diallil-éterbŐl, akrilamidból és N,N'-metilén-bisz-akrilamidból áll. A kapott liofilizált termék fajlagos aktivitása 120 E/g. 14. példa 20 mg dializáit urikázt 3 ml 0,1 mólos, 10,2 pH-értékű borát-pufferben 0,015 ml pentadienallal elegyítünk és a reakciókeveréket négy órán keresztül 4C -on keverjük. Ezután nitrogénatmoszférában 1 g akrilamidot és 60 mg N,N'-metilén-bisz-akrilamidot adunk hozzá 5 ml 0,1 mólos, 10,2 pH-értékű borát-pufferben oldva és a polimerizációt megindítjuk 0,1 ml 5%-os ammónium-peroxi-diszulfát-oldat és 0,1 ml 5%-os dimetil-propionitril -oldat hozzáadásával. A polimerizációt jégfürdőn végzett hűtés közben végezzük és a kapott gélt aprítjuk, majd 0,1 mólps, 10,2 pH-értékű - és nátrium-kloridra vonatkozólag is 0,1 mólos- borát-pufferrel mossuk és liofilizáljuk. A liofilizátum aktivitása 1,5 E/g. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás polimer hordozóhoz kötött biológiailag aktív fehérjék előállítására azzal jellemezve, hogy a biológiailag aktív fehérjét vizes oldatban egy kapcsolóvegyülettel, mely a hordozót képező 25 monomerrel polimerizáció útján létesítendő kapcsolathoz legalább egy funkciós csoportot és legalább egy, a fehérjét vizes oldatban acilezni vagy alkilezni képes csoportot — így etilén-imin-csoportot, telítetlen kötéssel aktivált halogenidcsoportot, 30 savhalogenidcsoportot, azidcsoportot, savanhidridcsoportot, aldehidcsoportot — tartalmazó vegyülettel reagáltatjuk, majd a kapcsolóvegyületet és a hordozót képező monomereket ismert módon együttesen polimerizáljuk. 35 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fehérjével reakcióba lépő alkalmas funkciós csoportként etilén-imin-csoportot, telítetlen kötéssel aktivált halogenidcsoportot, savhalogenidcsoportot, azidcsoportot 40 vagy savanhidridcsoportot használunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a hordozóanyagot ugyanabban a vizes oldatban, monomerek polimerizációja útján állítjuk elő. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a polimerizációra képes monomert vagy monomerkeveréket a fehérje és a kapcsolóvegyület reakciója után adjuk az oldathoz és az elegyet polimerizáljuk. 5. A 3. vagy 4. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy monomerként akrilsav-, metakrilsav, származékot vagy ezek keverékét használjuk. 6. Az előző igénypontok bármelyike szerinti 55 eljárás fopnatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan kapcsolóvegyületet alkalmazunk, amely a hordozót képező monomerrel kötés létesítésére alkalmas, kettőskötést tartalmaz. 45 50 2 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 774218 - Zrínyi Nyomda 4