169971. lajstromszámú szabadalom • Eljárás koleszterinoxidáz előállítására mikroorganizmusokból

11 169971 12 kötődik az ioncserélőhöz. Megállapítható tehát, hogy a 6. példában felületaktív szert tartalmazó vizes oldattal végzett mosás csak a szennyeződéseket távolítja el, az enzimet nem eluálja, mint az meglepő módon a puffert is tartalmazó detergens•oldattal végbemegy. 9. példa A 6. péda szerinti eljárást ismételjük meg, azzal az eltéréssel, hogy a mikroorganizmus-sejttömeghez, melyet foszfát pufferban szuszpendáltunk, nem-ionogén felületaktív szerként 2,0% Thesit-et (hidroxi-polietoxi-dodekánt) adunk, és a keverést 120 percen át végezzük. Ily módon 11.8 egység koleszterinoxidázt tartalmazó extraktumot kapunk, mely ugyancsak 3 E/milligramm specifikus aktivitásnak felel meg. 10 15 10. példa A 6. példa szerinti eljárást ismételjük meg azzal az eltéréssel, hogy nem-ionogén felületaktív szerként Tween 80-at (oleUszorbitán-polietilénglikoléter) alkalmazunk 1,5% koncentrációban és a keverést 120 percen át végezzük. Az extraktum enzimaktivitása és az enzim specifikus aktivitása megegyezik a 6. példában megadottal. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás koleszterinoxidáz előállítására mikroorganizmusokból, azzal jellemezve, hogy valamely, a koleszterint 3-helyzetben oxidálni képes mikroorganizmus, előnyösen Nocardia erythropolis ATCC 25544, ATCC 17859, ATCC 4277 vagy Nocardia formica ATCC 14811 törzsek sejttömegét adott esetben butanol-víz eleggyel végzett mosás után valamely nem-ionogén felületaktív szert előnyösen 2-[2-(p-terc-oktil-fenoxi)-2-nonil-etoxi]-etanolt, hidroxi-olietoxi-dodekánt vagy oleilszorbitán-polietilénglikolétert tartalmazó pufferoldat jelenlétében a sejtfal elroncsolásával feltárjuk, és a koleszterinoxidázt az extraktumból önmagában ismert módon izoláljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az enzimet az extraktumból ammónium-szulfát hozzáadásával kicsap-20 juk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy izolálás céljából a kivonatot anioncserélőre visszük fel, az enzimet felületaktív szert tartalmazó pufferoldattal eluáljuk, és az eluátumból ammóniumszulfát hozzáadásával kicsapjuk. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a feltárásnál 5—9 pH-jú puffert használunk. 5. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az ioncserélő elúciójához 0,01-0,2 mólos pufferoldatot használunk. 25 30 A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 774218 - Zrínyi Nyomda