169942. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-amino-3-htt metilcef-3-ém-4-karbonsavak mikrobiológiai előállítására

3 8. Glukóz-húsleves-ferde agar (30 C°, 24 óra): növekedése jobb, mint a húsleves-ferde agar táptalajon, kissé ragadós. 9. Glukóz-nitrát-ferde agar (30 C°, 1-3 nap): csaknem semmi növekedés. , 5 10. Tirozin-ferde agar (30 C°, 48 óra): növekedés van, a táptalaj kissé barnul. 11. Mannit-élesztőkivonat-agarlemez (30 C°, 48 óra): jól növekszik, színe fehér-halványsárga, felülete 10 sima, nedves, domború, a táptalaj színe nem változik. "12. 7% nátriumkloridot tartalmazó húslevesagar-lemez (30 C , 10 nap): alig van növekedés. 15 13. Glicerin-pepton-agarlemez. (30 C , 3 nap): növekedése jó, a telepek felülete sima, fényes, domború, a táptalaj megbarnul. 14. Tej agarlemez (30 C , 5 nap): 20 kazeint nem hidrolizál. 15. Taurokolát-agarlemez (30 C°, 15 nap): nem növekszik. 25 C) Fiziológiai tulajdonságok: 1. Nitrátredukció: negatív. 2. Denitrifikálás: negatív. 3. Metilvöröspróba: negatív (sárga). 30 4. Voges-Proskauer-reakció: pozitív. 5. Indolképződés: negatív. 6. Kénhidrogénfejlődés: negatív. 7. Keményítőhidrolízis: negatív. 8. Citráthasznosítás: pozitív. 35 9. Szervetlen nitrogénforrás hasznosítása: negatív. 10. Pigmentképzés: a táptalajtól függ. 11. Ureáz: negatív. 12. Öxidáz: pozitív. 40 13. Kataláz: pozitív. 14. Zselatinfolyósítás: negatív. 15. Argininhidrolízis: negatív. 16. Glukonátoxidáció: negatív. 17. Növekedés határai: 5 és 12 pH között, 5C 45 és 42 C közötti hőmérsékleten növekszik, növekedésének optimuma 7,0-8,5 pH és 28-35 C . 18. Aerób. 19. O—F próba: O—típusú és F típusú próbában nincs változás. 50 20. Szénhidrátok fermentálása: a következő szénhidrátokat nem fermentálja sav- vagy. gázfejlődés közben: L-arabinóz, D-xilóz, D-glukóz, D-mannóz, D-fruktóz, D-galaktóz, maltóz, szacharóz, laktóz, trehalóz, szorbit, mannit, inozit, ke- 55 ményítő. A fent felsorolt mikológiái tulajdonságú SY—77—1 törzsbeli mikroorganizmus rendszertani helyét keresve Cowan és Steel művére [Manual for 60 the Identification of Medical Bacteria, Ed. 1965] és a Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (7. Ed., 1961) című műre támaszkodva összehasonlítottuk azt rokon törzsek típustenyészetével, és megállapítottuk, hogy ez a törzs a Comamonas fajhoz 65 4 tartozik. Ezért az American Type Culture Collection (ATCC)-től kapott típustenyészettel hasonlítottuk össze az SY-77—1 törzset, és megállapítottuk, hogy ez a törzs hasonlít a Comamonas terrigenához, de annyiban különbözik tőle, hogy a SY—77-1 törzs erős bontó hatást gyakorol a II általános képletű vegyületek amidkötésére. A fentiekből kitűnik hogy az SY-77-1 törzs a Comamonas fajhoz tartozó új törzs, és Comamonas sp. SY—77-1-nek nevezzük. Ezt a törzset „FERM-P 2410" számon a Research Institute for Microbiological Industry and Technology, Agency of Industrial Science and Technology japán intézetnél letétbe helyeztük, és az US Department of Agriculture, ARS, Northern Utilization Research and Development Divisionnál ugyancsak letétbe helyeztük, és itt a NRRL B-8070 számot kapta. A 2 331 295 és 2 163 791 számú német szövetségi köztársasági nyilvánosságrahozatali iratok eljárást ismertetnek 7-amino-3-metil-cef-3-ém-4-karbonsav-számazékok előállítására mikrobiológiai úton olyan vegyületekből kiindulva, amelyek 7-helyzetű acilcsoportként fenilacetil- vagy fenoxiacetilcsoportot tartalmaznak, és a 3-helyzetű szubsztituens metilcsoport. A felhasznált dezacetilező mikroorganizmusok az Arthrobacter simplex, Kluyvera citrophila, Proteus rettgeri és Micrococcus sp., illetve Echerichia, Xanthomonas, Pseudomonas, Protaminobacter, Mycoplana és Aeromonas. A találmány szerint az új Comamonas sp. SY—77—1 törzs felhasználásával olyan II általános képletű vegyületeket dezacileztünk, amelyek 3-helyzetű metilcsoportja szubsztituált, és a 7-helyzetben 4-karboxi-butüamino-, illetve 5-karboxi-5-oxopentilamino-csoportot tartalmaznak, tehát az említett ismert eljárásokban alkalmazott kiindulási vegyületek, végtermékek és dezacilező mikroorganizmusok eltérőek. A találmány alkalmas a 7-helyzetű szubsztituensen szabad karboxicsoportot tartalmazó vegyületek dezacilezésére anélkül, hogy a 3-helyzetű metilcsoport szubsztituense károsodna, továbbá az ismert Comamonas terrigena törzzsel ellentétben képes az amidkötés erőteljes megbontására. A találmány tárgya tehát eljárás az I általános képletű szubsztituált 7-amino-3-rnetil-cef-3-ém-4-karbonsavak (a továbbiakban „I általános képletű amino vegyületek") egy II általános képletű vegyület dezacilezésével végzett előállítására olyképpen, hogy az utóbbi vegyületet folyékony táptalajban olyan mikroorganizmus tenyészettel vagy a dezacikző enzimet termelő mikroorganizmus tenyészetéből ismert módon kinyert készítménnyel kezeljük, amely a II általános képletű vegyület dezacilezésére képes. A találmány tárgya új eljárás a 7-amino-3-metil-cef-3-ém-4-karbonsavak mikrobiológiai előállítására analóg cefalosporin C vegyületekből, a farmakológiailag értékes cefalosporinszármazékok gyártásában fontos közbülső termékek előállítására. A találmány szerinti dezacilező reakcióban a Comamonas nembe tartozó SY—77-1 FERM-P2410 mikroorganizmus használható, amely a II általános képletű vegyületeket I általános képletű vegyületekké képes dezacilezni. 2