169929. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás
9 169929 10 KH2 P0 4 Na2 HP0 4 NaN03 MgS04 • 7H20 FeS04 ' 7H20 Ca(N03 ) 2 '4H 2 0 CuS04 • 5H20 ZnS04 • 7H20 MnS04 • 4H20 Na2 Mo0 4 • 2H20 1,6 g/liter 1,16 g/liter 1,18 g/liter 0,08 g/liter 0,014 g/liter 0,025 g/liter 8-xlO"' g/liter 6,8 xlO"7 g/liter 6,0xl0~7 g/liter 4,8 x 10"7 g/liter 3. táblázat Metánon mért növekedés 3 nap után a T3 jelzésű kultúrában jelenlevő baktériumok különböző 5 kombinációit használva Az inokulumban jelenlevő mikroorganizmusok Növekedés mértéke (optikai sűrűség egységek 3 nap után) 10 A kultúrákat 500 ml térfogatú steril üvegedényekben tenyésztjük, amelyeken folyamatosan metán-levegő keveréket buborékoltatunk át. A készülék lombik-sorozatból áll, amelyen 25% metán és 75% levegő keverékét buborékoltatjuk át „sintersol" szűrőn keresztül. A készülék nyílásain át végezzük az inokulációt és a mintavételt. A lombikokat a négy (M,, M2 , M 3 és M 4 jelzésű) mikroorganizmus friss, 24 órás kultúrájának 1,5 ml-ével, a metánt hasznosító (SM3 jelzésű) mikroorganizmus és a metanolt hasznosító (OML jelzésű) mikroorganizmus 2-3 napos kultúrájának 4_4 ml-ével inokuláljuk, a kultúrákat rázott ISM táptalajban készítettük. A lombikok 400 ml fenti ISM táptalajt tartalmaznak, a növekedést az optikai sűrűség 625 mM-on történő mérésével követjük. Az eredményeket az alábbi 3. táblázatban adjuk meg. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a metánon való legjobb növekedéshez a vegyes kultúrára van szükség. Az eredmények egy kissé javulnak, ha metanolt hasznosító mikroorganizmus van jelen, a legjobb eredményt azonban akkor kapjuk, ha az összes komponens jelen van. SM3 SM3, OML 15 SM3, ML M2 , M 3 , M 4 SM3, OML, Mi, M3 , M 4 0,14 0,25 0,27 0,59 Ezek az eredmények 3 kísérlet átlagértékei, a 20 kísérleteket 2- vagy 3-szor ismételtük. 4. példa Az alábbi kísérleteket annak az eldöntésére vé-25 geztük, hogy a T3 jelzésű kultúra komponenseit helyettesíthetjük-e egyéb, hasonló funkciójú mikroorganizmusokkal. A kultúrákat a 3. példa szerinti módon készítettük üveg lombikokban, ezeken buborékoltattuk át a gázt. Néhány esetben azonban 30 T3 jelzésű kultúra metanolt hasznosító mikroorganizmusát az NCIB 11 040 szám alatt letétbe helyezett metanolt hasznosító mikroorganizmussal helyettesítettük. Hasonlóképpen a T3 jelzésű kultúra nem-metilotrófiás komponensét az NCIB 11 019, 11 020, 11 021 és 11 022 szám alatt letétbe helyezett nem-metilotrófiás mikroorganizmusokkal helyettesítettük. Ezeknek a kísérleteknek az eredményeit az alábbi 4. táblázatban adjuk meg. Az értékek 2 kísérlet átlagai, kultúránként mind-40 egyiket négyszer ismételjük. 35 4. táblázat Különböző, metánon növekedő vegyes kultúrák optikai sűrűségének 625 rn^i-on mért növekedése Kultúra metanolt nem-metilonem-metiloOptikai sűrűség metánt metanolt hasznosító trófiás trófiás 625 míi-on hasznosító hasznosító (NCIB M,, M2 ,M 3 (NCIB 3 nap után (SM 3) (OML) 11 040) és M4 11019-11022) + - + + .+ - + -jelölés: + jelen van a kultúrában, - nincs jelen a kultúrában. +' 0,53 0,56 0,57 A 4. táblázat függőleges oszlopaiban szereplő értékek közötti különbség nem jelentős. Levonhatjuk tehát azt a következtetést, hogy a metanolt hasznosító NCIB 1.1 040 szám alatt letétbe helyezett 65 mikroorganizmussal helyettesíthető az OML jelzésű mikroorganizmus. Ugyanígy a nem-metilotrófiás komponensek szintén kicserélhetők. 5
