169929. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás
5 169929 6 lecsapással, és ezt követő centrifugálással és/vagy szűréssel. Ezután a biomasszát szárítjuk, például fagyasztva vagy porlasztva szárítással, és ebben az alakban használhatjuk fel mint emberi vagy állati protein táplálékot vagy táplálék-adalékot. 5 A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa Metánon termelődő baktérium-kultúrák izolálása 10 Metánon termelődő vegyes baktérium-kultúrát izoláltunk trópusi kacsafarm iszap-mintájából. A minta 2 g-ját 250 ml-es 25 ml ISM táptalajt (ame- 15 lyet a 3. példában írunk le) tartalmazó rázó-lombikba visszük, és naponta kétszer 25% metánt és 75% levegőt tartalmazó gázkeveréket vezetünk bele. A lombikot 2,5 cm bolygás sugarú, percenként 200 fordulattal forgó rázógépen inkubáljuk egy hé- 20 ten át. A kultúrát, amely zavarossá vált, ugyanolyan rázó lombikokba oltjuk át aszeptikus körülmények között, 2 ml inokulumot használva. Ezt néhányszor megismételjük, és amikor reprodukálható, jó növekedést tapasztalunk, a rázólombikban 25 levő kultúrát az 5. példában leírt típusú fermentor inokulálásához használjuk fel. A kapott, T3 jelzésű kultúra jellemzőit a 2. példában ismertetjük részletesen. 30 2. példa A T3 jelzésű kultúra mikrobiológiai jellemzői 1. A kultúra SM3 jelzésű (NCIB 11 084) obligát, 35 metánt hasznosító baktériumot tartalmaz, amely valamely metanolt hasznosító baktériummal és nem-metilotrofiás baktériumok species-évei együtt nő. Az SM3 (NCIB 11 084) jelzésű metánt hasznosító organizmus morfológiája némileg variábilis, rö- 40 vid pálcák vagy coccus pálcák alakjában jelenik meg, és belső membrán struktúrája van, amely a sejtben párhuzamos halmazatokban van elrendezve. Ez az organizmus egyedül csak kis mértékben nő metánon. A fenti leírás alapján úgy tűnik, hogy ez 45 a mikroorganizmus Methylomonas típusú (NCIB 11 084), eddig még le nem írt species. 2. A metanolt hasznosító OML jelzésű mikroorganizmust (NCIB 11 112) az jellemzi, hogy csak olyan agar-lemezen képes növekedni, amely egye- 50 d^üli szénforrásként metanolt tartalmaz. Nem tapasztalható növekedés glükóz, laktóz, szacharóz, mannit, inozit, citrát vagy táp-agar jelenlétében. A mikroorganizmus körülbelül 2 ß hosszú és 1 ju széles, egyszerű poláris flagelluma van. Az agáron levő kolóniák simák és szürkék,, kimondott szegélyük van, metanolt és ásványi sókat tartalmazó aga/ lemezeken 2 napon át 42 C on végzett inkubálás után jelennek meg. A fenti leírás alapján úgy tűnik, hogy a mikroorganizmus Pseudomonas típusú, eddig még le nem írt species (NCIB 11 112). 3. Egyéb mikroorganizmusokat is izoláltunk a keverékből, amelyek sem metánon, sem metanolon mint egyedüli szénforráson nem növekednek. Ezeket Mi, M2 , M 3 és M 4 jelzéssel jelöltük. Standard próbáknak vetettük alá őket annak érdekében, hogy meghatározzuk, milyen mikroorganizmus rendhez tartoznak. Az alkalmazott próbákat az alábbi szakkönyvekben írták le: a) Cowan S.T. és Steel K.J.: Manual for the Identification of Medical Bacteria, Cambridge University Press (1966.), b) Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 7. kiadás, Williams and Wilkins (1959.), c) Skerman V. B. D.: A Guide to the Identification of the General of Bacteria, 2. kiadás, Williams and Wilkins (1967.). Néhány ilyen próbának más megvalósítási módja is van, az alábbiakban részletesen megadjuk az ezekben az esetekben ténylegesen alkalmazott módszert. Oxidáz próba: Kovács, 1956. Indol termelés: Kovács-féle reagens, 1928. Voges-Proskauer próba: Barritt, 1936. Ureáz termelés: oxoid közeg, Christensen-féle közeg, 1946. Citrát hasznosítás: növekedés Simons-féle ferde citrát szubsztrátumon, Koser-féle táptalajban meghatározva. Ezeknek a próbáknak az eredményét az alábbi 1. és 2. táblázatban adjuk meg. A próbák eredményeiből a mikroorganizmusok azonosságára vonatkozóan az alábbi következtetéseket vonhatjuk le. Az Mi jelzésű mikroorganizmus a Pseudomonas speciese (NCIB 11 062). Az M2 jelzésű mikroorganizmus a Mycobacterium speciese (NCIB 11 061). Az M3 jelzésű mikroorganizmus a Pseudomonas speciese (NCIB 11 063). Az M4 jelzésű mikroorganizmus a Pseudomonas speciese (NCIB 11 065). 1. táblázat A T3 jelzésű vegyes kultúrában jelenlevő, metánt nem hasznosító baktériumok azonosítása, első kísérlet-sorozat Próba M, Gram elszíneződés Alak Spóra-képződés pálcika M, + pálcika M, pálcika M4 pálcika
