169913. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-6-dezoxi-5-hidroxi-tetraciklin előállítására
7 169913 8 dimetil-formamidban oldott 100 mg (0,21 mM) 6-metSlén -5 -hidroxi-tetraciklin-hidrokloridot fecskendezünk a lombikba és a képződött oldatot 70 C°-on 18 óráig melegítjük. A reakcióelegyből vett mintát szilikagél-lemezen 5 kromatografáljuk, a lemezt előzőleg 0,005 n nátrium-acetáttal és ecetsavval pH 6-ra beállított 0,002 n etilén-diamin-tetraecetsav-permettel kezeltük és éjszakán át HOC -on szárítottuk. A kromatográfiát felszálló rendszerben 95% tetrahidrofurán 10 és 5% víz futtatóeleggyel hajtjuk végre, az előhíváshoz ammóniát használunk. Az a-6-dezoxi-5--hidroxi-tetraciklin sárga folt alakjában jelenik meg 366 mji hullámhosszú ultraibolya fényben. Az eredmények szerint az a- és a ß-6-dezoxi-5-hidroxi-tet- 15 raciklin aránya 5:1. A reakcióelegy többi részét leszűrjük és a benzolt csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A maradék zöld oldatot szűrjük és a szűrletet 2 ml 10%-os, vizes szulfoszalicilsav-oldattal, majd 6 ml vízzel ke- 20 zeljük. A képződött sűrű szuszpenziót 10 perc keverés után szűrjük, a szilárd anyagot vízzel mossuk és szárítjuk. A szilárd anyagot minimális mennyiségű vízben oldjuk és nagy nyomású folyadék-kromatográfiás 25 oszlopra visszük fel, az oszloptöltet szabályozott felszín-porozitású hordozóra felvitt kvaterner ammónium-csoportokkal szubsztituált metakrilát-polimer [3 485 658 és 3 505 785 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás]. A termé- 30 ket 0,005 n nátrium-acetátból és ecetsavval pH 5,8-ra beállított 0,002 n etilén-diamin-tetraecetsavból álló puff érrel eluáljuk 115 atm nyomáson. Az oszlop kivezetőrészénél ultraibolya jelzőkészülék (254 mju) méri az eluátum tetraciklin-tartalmát, az 35 ultraibolya mérést pedig Varian A-25 íróhegyes feljegyzőkészülék regisztrálja. A mérések azt mutatják, hogy az ot-6-dezoxi- és a ß-6-dezoxi-5-hidroxi-tetraciklin kitermelése 35-40%, melynek 83%-a a kívánt a-epimer és 17%-a a 0-epimer. 40 2. példa Argongázzal megtöltött 3-nyakú lombikba be- 45 mérünk 0,5 ml benzolban oldott 35 mg (0,13 mM) trifenil-foszfint, 4,5 ml benzolban oldott 180 mg (0,52 mM) dikobalt-oktakarbonüt és az oldatot szobahőmérsékleten 15 percig keverjük. 2,5 ml dimetil•acetamidban oldott 250 mg (0,52 mM) 6-metilén- 50 -5-hidroxi-tetraciklin-hidrokloridot, majd 0,6 ml 1 :1 arányú (térfogat per térfogat) dimetil-acetamid/12 n sósav (3,4 mM) oldatot adunk hozzá és a reakcióelegyet 115 C -on 4 óráig melegítjük. Ezután az elegyet lehűlni hagyjuk és szűrjük. A 55 benzol eltávolítása céljából a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk, majd ismét szűrjük. A szűrlethez 5,0 ml 10%-os, vizes szulfoszalicilsav-oldatot, majd 15 ml vizet adunk. A kivált szulfoszalicilsavas sót leszűrjük és szárítjuk. Kitermelés 445 mg 60 (72%). A minta nagy nyomású folyadék-kromatográfiája (az 1. példa szerint) azt mutatja, hogy a termék 75-80% a-6-dezoxi-5-hidroxi-tetraciklinből, 1-2% 0-6-dezoxi-5-hidroxi-tetraciklinből és 15-20% nem-reagált 6-metilén-5-hidroxi-tetraciklinből áll. 65 A nyersterméket metanol/víz elegyből átkristályosítjuk, és sósavat tartalmazó etanol/víz elegy hozzáadásával hidroklorid-sóvá alakítjuk át. A kivált hidroklorid-sót minimális mennyiségű vizet tartalmazó etanolból átkristályosítva tovább tisztítjuk. 3. példa 5 ml benzolban oldott 27,5 mg (0,104 mM) trifenil-foszfinhoz nitrogénatmoszférában 5 ml benzolban oldott 180 mg (0,52 mM) dikobalt-oktakarbonüt, 5 ml dimetil-formamidban oldott 250 mg 6-metilén-5-hidroxi-tetracMin-hidrokloridot és 1 ml dimetil-formamidban oldott 18 mg (0,52* mM) hidrogén-kloridot adunk és a reakcióelegyet 85 C on 3 óráig melegítjük. A nagy nyomású folyadék-kromatográfia azt mutatja, hogy nem marad vissza nem-reagált tetraciklin kiindulási anyag és a redukció teljes. A reakcióelegyet lehűtjük szobahőmérsékletre és az 1. példában leírt módon feldolgozzuk. A kapott 260 mg szulfoszalicilsavas só 98% a-6-dezoxi-5-tetraciklinből áll. A nyers szulfoszalicilsavas sót hidrokloriddá alakítjuk át sósavat tartalmazó etanol/víz elegy hozzáadása útján. Metanol/víz elegyből történő további átkristályosítás tiszta a-6-dezoxi-5--hidroxi-tetraciklin-hidrokloridot eredményez. 4. példa Az 5. példa eljárását megismételjük azzal a különbseggel, hogy trifenil-foszfin. helyett az alább feltüntetett foszfinokat használjuk. A termék a-6-dezoxi-5-hidroxi-tetraciklint (a-dezoxi), 0-6-dezoxi-5-hidroxi-tetraciklint (ß-dezoxi) és 6-metilén-5--hidroxi-tetraciklint (metaciklin) tartalmaz az alábbi megoszlásban: Foszfin ct-dez- /J-dez- Metacikoxi % oxi % lin % (C4 H 9 ) 3 P 19 ~0,3 80 (cJkloC6 H,i) 3 P 23 <1 77 p-CH3 OC 6 H 4 )3P 26-55 0,5-3 42-74 (p-FC6 H 4 ) 3 P 38 ~0,6 61 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a-6-dezoxi-5-hidroxi-tetraciklin-hidroklorid előállítására 6-metilén-5-hidroxi-tetraciklinnek vagy hidroklorid-sójának katalizátor jelenlétében végzett redukciója útján, azzal jellemezve, hogy a 6-metilén-5-hidroxi-tetraciklint vagy hidroklorid sóját dikobalt-oktakarbonillal, trifenil-foszfinnal és ásványi savval reagáltatjuk egy aromás oldószer és egy aprotikus, erősen poláros oldószer elegyében közömbös atmoszférában, 80—115 C reakcióelegyhőmérsékleten, és a 6-metilén-5-hidroxi-tetracik-4
