169814. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vér koleszterin-tartalmát csökkentő készítmények előállítására
5 169814 6 normális felszívódását nem befolyásolja; ez igazolható Thompson W. G. és tsai módszerével [Gut, 10, 717 (1969)]. Thomas és tsainak a fent idézett dolgozatban ismertetett módszerével igazolható, hogy a találmány szerinti eljárással előállított készítmény a vas felszívódását nem befolyásolja. A találmány szerinti eljárással előállított készítménynek a trigliceridszintet csökkentő hatása Kraml M. és tsai módszerével igazolható [Clin. Biochem 2, 373 (1969)]. A találmány szerinti eljárással előállított készítmény kedvező farmakológiai tulajdonságait az alábbi példák illusztrálják. A példákban megadott koleszterin-szintet Zlatkis A. és munkatársai módszerével [Biochemistry 5, 1060 (1966)] határoztuk meg. . A koleszterin bioszintézisét Cayen M. és munkatársai módszerével [Can. J. Biochem. 46, 179 (1968)] vizsgáltuk. A koleszterin- és epesav-kiválasztást Bongiovanni A. M. és munkatársai módszerével [J. Clin. Endocrinol. 25, 678 (1965)] határoztuk meg. 1. példa Clofibrat és dioszgenin együttes alkalmazásának hatása koleszterinnel táplált patkányok vérszérumának koleszterin-szintjére A kísérletekhez 200 g testsúlyú, Sprague—Dawley fajú hím albínó patkányokat használtunk fel. Az állatokat 5 csoportba osztottuk (minden csoportba 10—10 állat tartozott), és az állatokat 1 hétig a következő eleségekkel tápláltuk: 1. csoport: Purina-táp; 2. csoport: 1% koleszterint tartalmazó Purina-táp; 3. csoport: 1% koleszterint és 2% diószgenint tartalmazó Purina-táp; 4. csoport: 1% koleszterint és 0,4% clofibrátot tartalmazó Purina-táp; 5. csoport: 1% koleszterint, 0,5% diószgenint és 0,125% clofibrátot tartalmazó Purina-táp. 1 hét elteltével a fent ismertetett módon meghatároztuk az állatok vérszérumának koleszterin-szintjét. Az eredményeket az 1. táblázatban közöljük. 1. táblázat Szérum koleszterinCsoport Adalékanyagok szintje mg/100 ml átlag ± standard hiba í. 50,7+2,84 2. 1% koleszterin 60,3 ±2,72 3. 1% koleszterin + 2% dioszgenin 51,3 ±4,12 4. 1% koleszterin + 0,4% Clofibrat 52,6 ±3,75 5. 1% koleszterin + 0,5% dioszgenin +0,125% Clofibrat 46,4 ±2,81 A táblázat adataiból megállapítható, hogy a diószgenint és clofibrátot egyaránt tartalmazó, koleszterinnel dúsított táppal kezelt patkányok vérszérumának koleszterin-szintje lényegesen nagyobb mértékben csökkent, mint a csak diószgenint vagy csak clofibrátot tartalmazó, koleszterinnel dúsított táppal kezelt állatoké, annak ellenére, hogy a két hatóanyagot a táp lényegesen kisebb koncentrációban tartalmazta. A dioszgenin 5 és a Clofibrat egyedi hatásából a koncentrációk figyelembevételével számított, várható koleszterinszint-csökkenés 4,65 mg/100 ml, ezzel szemben a ténylegesen mért érték 13,9 mg/100 ml, azaz háromszorosa a várható értéknek. Ezek az adatok egyértelműen igazolják, hogy 10 a dioszgenin és a Clofibrat szinergetikusan fokozzák egymás koleszterinszint-csökkentő hatását. 2. példa 15 Clofibrat és dioszgenin együttes alkalmazásának hatása patkányok koleszterin-bioszintézisére 100 g testsúlyú hím albínó patkányokat 1 hétig Purina 20 táppal tápláltunk; a táplálékhoz 0,25% clofibrátot és/ vagy 1% diószgenint adtunk. Egy hét elteltével az állatokat leöltük, az állatok májából homogenizátumot készítettünk, és a homogenizátumot (2—14 C)-acetáttal inkubáltuk. Az inkubálás során a jelzett (radioaktív) 25 szénatom a jelenlevő koleszterinbe épül be. Ezután a májhomogenizátumot elkülönítettük, és radioaktív szcintillációs módszerrel meghatároztuk a máj koleszterin-tartalmát (valamennyi koleszterin-molekula tartalmaz jelzett szénatomot). Az észlelt eredményeket a 2. 30 táblázatban közöljük. 2. táblázat (14 C) beütés/perc alapján a koleszterin/mg menynyisége,* mg nitrogén Kontroll Dioszgenin Clofibrat Clofibrat + dioszgenin 1570± 220 23 200 ±2750 100 ± 24 680 ± 190 *Az átlagértékeket és az eltéréseket 9 állatnál mért eredmény alapján számítottuk. A 2. táblázat adataiból a következőket állapíthatjuk 45 meg: Az 1% diószgenint tartalmazó táppal etetett patkányok májában a dioszgenin hatására rendkívül nagy mértékben fokozódik a koleszterin bioszintézise (a leölt állatok májának koleszterin-tartalma körülbelül 15-szöröse a normál szintnek). A 0,25% clofibrátot tartal-50 mázó táppal etetett patkányok májában ezzel szemben a normál érték kb. 7%-ára csökken a bioszintetizált koleszterin mennyisége. A dioszgenin által kiváltott, 23 200 —1570 = 21 630 egységnyi koleszterinszint-növekedés és a Clofibrat által kiváltott, 1570 - 100 = 1470 55 egységnyi koleszterinszint-csökkenés figyelembevételével azt várhatnánk, hogy Clofibrat és dioszgenin együttes adagolása esetén az állatok máj-koleszterin-szintje 21 630 — 1470 = 20 160 egységgel növekedni fog. A mért értékek ezzel ellentétben azt bizonyítják, hogy Clofibrat 60 és dioszgenin együttes adagolása esetén 1570—680 = = 890 egységgel csökken az állatok májának koleszterin-szintje, ami egyértelműen bizonyítja, hogy a Clofibrat és a dioszgenin együtt adagolva a várhatótól eltérően lényeges mértékben csökkenti a koleszterin bio-65 szintézisét. 3
