169764. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 30504 RP antibiotikum és származékai előállítására
3 169764 4 Rf -értékek: A 30 504 RP vékony kovasavgél-rétegen felszálló kromatografálással a következő Rf-értékeket mutatja: 50:50:25:5 térfogatarányú etilacetát-ciklohexán-víz-butanol-keverékkel Rf = 0,45; 94:6 térfogatarányú metilénklorid-metanol-keverékkelRf =0,55. A 30 504 RP antibiotikum nátriumsójának azonosítási adatai a következők: aj Optikai forgatóképesség (1%-os oldat, metanolban): [«]*>=-34+1°; M?4°6= -43,5+1°; [a]4 2 3° 6 = -91,5+ 1,5°; [a]f» 5 = -217+3°. b) Bázisos egyenértéke vízmentes közegben (0,01 n perklórsavval ecetsavban meghatározva) 1,25 mólegyenérték/g (800 molekulasúlynak felel meg). A 30 504 RP nátriumsója 1,15 mólegyenérték Na+iont tartalmaz g-onként. A trietanolamin só optikai forgatóképessége: [«]D = —46,1° (1%-os oldat, metanolban). In vitro bakteriosztatikus hatékonyság: A 30 504 RP különösen bizonyos Gram-pozitív baktériumokkal szemben bakteriosztatikus hatást gyakorol. A 30 504 RP bakteriosztatikus hatékonyságát számos mikroorganizmussal szemben az erre a célra használatos hígításos módszerrel határoztuk meg. Mindegyik mikroorganizmus esetében meghatároztuk a hatóanyagnak azt a legkisebb koncentrációját, amely alkalmas folyékony táptalajban, meghatározott körülmények között szemmel láthatóan megakadályozni képes fejlődésüket. A meghatározások eredményeit az alábbi 2. táblázatban foglaljuk össze. A legkisebb bakteriosztatikus koncentrációkat a táptalaj 1 ml-ében levő mikrogramm anyagmennyiségként fejezzük ki. 2. táblázat Baktériumok Legkisebb bakteriosztatikus koncentráció ([ig/ml) Staphylococcus aureus, 209 P — ATCC 6538 P-törzs 0,2 Staphylococcus aureus, Smith-törzs 0,5 Sarcina lutea — ATCC 9341 0,9 Streptococcus faecalis — ATCC 8043 0,1 Streptococcus pyogenes hemolyticus, Dig-törzs* 0,2 Diplococcus pneumoniae, Til-törzs* 0,05 Neisseria catarrhalis, A 152* 6 Bacillus subtilis — ATCC 6633 0,2 Bacillus cereus — ATCC 6630 0,1 Mycobacterium species — ATCC 607 6 Escherichia coli — ATCC 9637 >150 Shigella dysenteriae, Shiga L* >150 Salmonella paratyphi A, Lacasse törzs* >150 Salmonella schottmuelleri (paratyphi B) Fougenc-törzs* >150 Proteus vulgaris >150 Pseudomonas aeruginosa >150 * Institut Pasteur Toxicitás: Csirkéknél az 50% letalitást okozó adag (DL50 ) 85 mg perorálisan beadva. Kokcidiózis elleni hatékonyság: A kokcidiózis elleni hatékonyságot Eimeria tenella és Eimeria acervulina mikroorganizmusokkal fertőzött csirkéken határoztuk meg. 5 A csirkék eleségébe kevert 30 504 RP hatékonysága akkor nyilvánul meg, ha az eleség 0,005—0,04 súly% nem-toxikus koncentrációban ilyen antibiotikumot tartalmaz. Maláriaelleni hatékonyság: A 30 504 RP a kísérleti-10 leg Plasmodiummal fertőzött egerekben és kis csirkékben malária elleni hatást fejt ki. A 30 504 RP antibiotikumot termelő mikroorganizmust Indiában vett talajmintából izoláltuk, a Streptomyces nembe tartozó törzsnek találtuk, és a DS 25 881 15 számot kapta. A mikoorganizmus egy mintáját az Amerikai Egyesült Államot Földművelésügyi Minisztériuma Northern Regional Research Laboratory (Peoria, Illinois) törzsgyűjteményében deponáltuk, és ott az NRRL 5785 számot kapta. 20 A mikoorganizmust jellemző tulajdonságai alapján nem lehetett egyetlen már leírt törzzsel sem azonosítani, ezért új törzsnek, a Streptomyces gallinarius DS 25 881 elnevezésű törzsnek kell tekinteni. Az új törzset szokásos módon különítettük el. E cél-25 ból egy kis talajmintát steril desztillált vízben szuszpendáltunk, a szuszpenziót különböző koncentrációkra hígítottuk, minden hígításból egy kis mintát Petri-csészében levő agaros táptalaj felületén szélesztettünk, majd néhány napig 26 C°-on inkubáltuk. A mikroorganiz-30 mus-telepek kifejlődése után a tanulmányozni kívánt telepeket leemeltük, és tápagarra átoltottuk, hogy bőségesebb tenyészetet kapjunk. A Streptomyces gallinarius DS 25 881 1,0—1,2 X X0,8—1,0 fj. méretű hengeres vagy tojásdad alakú spó-35 rakat termel; a spóratartók fürtökben helyezkednek el; a laza és hajlékony spóratermő szálak a végükön gyakran behajlanak, ezáltal kissé visszahajló alakot vesznek fel, vagy egy vagy több menetes spirálist képeznek. Spórásodása alapján ez a törzs a Pridham-féle osztályo-40 zás értelmében a Retinaculum-Apertum csoportba sorolható. A Streptomyces gallinarius DS 25 881 26 és 37 C° között jól tenyészik, de 50 C°-on már nem fejlődik. Spórás légmicéliuma szürke színű. Vegetatív micéliu-45 mának színe a tenyészközegtől függően sárga, szürkéssárga-barnássárga vagy sárgásbarna lehet. Azonkívül, hogy Hickey- és Tresner-féle agáron tenyésztve barnásibolya-rózsaszínű oldható pigmentet képez, az összes többi megfigyelt táptalajon oldható pigmentet termel, 50 ennek színe kevésbé élénk, és barnássárgától vagy barnásszürkétől sárgásbarnáig terjedhet. A 26 C°-on inkubált tenyészetek biokémiai tulajdonságai a következők: melanintermelés: — 55 kénhidrogén-termelés: — tirozináz: — zselatin elfolyósítása: + cellulóz hasznosítása: + nitrittermelés nitrátokból: erősen pozitív mind nitrá-60 tos húslevesen, mind szintetikus közegben keményítőhidrolízis: + fölözött tejes tenyészet: peptonizáció koaguláció nélkül; nagyon csekély pH-csökkenés A Streptomyces gallinarius jellemző tenyésztési ada-65 tait a 3. táblázatban foglaltuk össze. A tenyészetek jól 2
