169510. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (+)-2-amino-1-butanol előállítására
9 169510 10 oxiddal eluáljuk és utána a vizet csökkentett nyomáson eltávolítjuk, ily módon 4,2 g L-2-aminovajsavat kapunk. Az átalakulás 81,5%, míg az elméletileg kapható L-2-aminovajsav mennyisége 5,15 g lehet. 5 Op. 272-273 C° (bomlik). Elemzés Számított: C = 46,6%, H = 8,8%, N = 13,6%, 10 Talált: C = 46,7%, H = 8,7%, N = 13,7%. Az optikai tisztaság 99,2%. (a)i)9 =+18,65° (C = 4,8, 6n HCl) érték alapján, 15 amely a Merck Indexben (7. kiadás) le van írva. Másrészt az ioncserélő gyantán nem adszorbeált folyadékot egyesítjük és lényegében az összes vizet eltávolítjuk csökkentett nyomáson. Ezután a nem reagált N-acetil-D-2-aminovajsavat etilacetáttal extra- 20 háljuk. Az etilacetát és kis mennyiségű ecetsav eltávolítása után 5,7 g N-acetil-D-2-aminovajsavat kapunk. A kitermelés 78,6%, az elméletileg kapható N-acetil-D-2-aminovajsav mennyisége 7,25 g. 25 Op. 132,4C°. (tt)3r= +40,2° ± 0,1° (C = 10,5 H2 0). 2. példa 30 14,5 g N-acetil-DL-2-aminovajsavat feloldunk 1 liter vízben és az oldat pH-ját 8,0 értékre állítjuk be lítium-hidroxid-oldattal. Az oldathoz 83 mg kobalt(H)klorid • 2H2 0-t és 21 750 egység gomba-acilázt 35 adunk és a reagáltatást 37C°-on végezzük. Ha az L-2-aminovajsav termelését ninhidrin használata mellett kolorimetriás meghatározással követjük, látjuk, hogy a körülbelül 100%-os átalakulást 17 óra alatt érjük el. A reakció befejeződése után 5 g 4 0 aktívszenet adunk az elegyhez és az acilázt szűréssel elkülönítjük. A szűrletet az 1. példában leírt módon Dowex 50-X8 jelű ioncserélő gyantával töltött oszlopon bocsájtjuk át annak érdekében, hogy adszorbeáljuk azon az L-2-aminovajsavat és az 45 N-acetü-D-2-aminovajsavat elkülönítjük. Az oszlopon adszorbeált L-2-aminovajsavat 2n ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk és az eluátum vizét csökkentett nyomáson eltávolítjuk, ily módon 4,0 g L-2-aminovajsavat kapunk. s 0 A kitermelés 77,7%, az elméletileg előállítható L-2-aminovajsav mennyisége 5,15 g lehet. (aíl1 = +18,4° ± 0,5° (C = 10,3, 5 n HCl). Az optikai tisztaság 98,7% (a)J)9 =+18,65° (C = 4,8, 6n HCl) érték alapján, 55 ahogy a Merck Indexben (7. kiadás) le van írva. 3. példa 60 Anioncserélő gyanta (hordozóanyag) készítése 24 mól% sztirol, 75 mól% 2-vinilpiridin és 1 niól% divinilbenzol monomer-elegyet szuszpenzióban polimerizálunk benzoilperoxid gyökös katali- 65 zátor jelenlétében és az így kapott polimert metilbromiddal kvatemerezzük. A kvaternerezett sztirol(2-vinilpiridin)divinilpiridin szabálytalan kopolimer egy részét (anioncserélő kapacitás: 4,2 mülimólegyenérték/g) 50 rész 0,1 mólos 8,0 pH-jú foszforsav-pufferoldatban tartjuk 24 órán keresztül, majd szűréssel elkülönítjük és így egy nedves hordozóanyagot kapunk. Aciláz adszorpciója a hordozóanyagon (rögzített enzim készítése) Az így készített nedves hordozóanyag egy részét keverés közben szobahőmérsékleten hozzáadjuk az enzim oldatához, amelyet úgy készítünk, hogy 0,5 rész kereskedelmi acilázt (aktivitás: körülbelül 10 000 egység/g) 50 rész 0,1 mólos foszforsav-pufferben oldunk (pH = 8,0). A nedves hordozóanyagot 3 óra múlva szűréssel elkülönítjük, néhányszor vízzel mossuk és utána fagyasztva szárítjuk. Az enzimaktivitás N-acetil-DL-2-aminovajsavra körülbelül 2 000 egység/g. N-acetil-DL-2-aminovajsav folyamatos rezolválása (L-2-aminovajsav folyamatos előállítása) 1 g rögzített enzimet (körülbelül 2 000 egység) 1,5 cm átmérőjű oszlopba töltünk. Meleg víz keringtetésével a belső hőmérsékletet 50 C°-ra emeljük és 0^2 mól N-acetil-DL-2-aminovajsav-oldatot (pH = 7,0) táplálunk be folyamatosan az oszlop felső részéből 5 ml/óra áramlási sebességgel. A folyamatos reakciót körülbelül 500 órán vezetjük, az enzimaktivitásban csökkenés nem észlelhető és körülbelül 100%-os átalakulást érünk el, ami meglepően kitűnő eredmény. Az 1. példában leírt módon a reagens-oldatot aktívszénnel kezeljük, majd ioncserélő gyantával hozzuk érintkezésbe és így L-2-aminovajsavat kapunk, amelynek optikai tisztasága 99% vagy még jobb. 4. példa Aciláz megkötése DEAE-Sephadex segítségével 25 rész DEAE-Sephadex-et (védjegy, Pharmacia Fine Chemical Co., Ltd., terméke) 50 rész 0,1 mólos 8,0-as pH-jú foszforsav-pufferoldatban tartunk 24 óra hosszat és utána szűréssel elválasztjuk. Ily módon nedves hordozóanyagot kapunk, amelyet keverés közben, szobahőmérsékleten hozzáadunk egy enzimoldathoz, amelyet úgy készítünk, hogy 0,5 rész kereskedelmi gomba-acilázt (körülbelül 10 000 egység/g) 50 rész 0,1 mólos foszforsav-pufferoldatban (pH = 8,0) oldunk. A nedves hordozóanyagot körülbelül 3 óra múlva elkülönítjük, néhányszor vízzel mossuk és végül fagyasztva szárítjuk. A rögzített enzim aktivitása N-acetil-DL-2-aminovajsavhoz körülbelül 700 egység/g. 5
