169456. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9-helyettesített 3-aminokarbazol-származékok előállítására és e vegyületeket tartalmazó tesztcsíkok ill. tesztfilmek
169456 10 8. példa Tesztpapír glükóz kimutatása vizeletben Szűrőpapírt átitatunk a következő összetételű oldattal és 50 C -on szárítjuk: 1,2 mólos citrátpuffer (pH 5) 50,0 ml 9-(7-dimetilaminopropil)-6-klór-3-aminokarbazol-dihidroklorid 0,75 g glükózoxidáz (104 egység/mg) 0,25 g peroxidáz (63 egység/mg) 0,05 g vízzel feltöltve 100,0 ml-re. A tesztpapír a glükóztartalmú vizelettel vöröses-narancs színtől feketéspirosig terjedő színárnyalattal reagál. Különböző eredetű vizeletek, valamint acetecetsav-tartalmú vizelet azonos glükózkoncentrációnál színárnyalatban lényeges eltérést nem mutat. 9. példa Amennyiben a 8. példában mégadott recepturában indikátorként a következő indikátorból 0,02-0,02 mólt alkalmazunk, gyakorlatilag azonos tulajdonságú tesztpapírokat kapunk, csupán ezek a papírok más színárnyalattal reagálnak: 9-(|3-dimetilaminoetil)-6-klór-3-aminokarbazol-dihidroklorid (a színárnyalatok okkertől tintakéken keresztül feketéig terjednek). 9-(/3-dimetilaminoetil)-3-aminokarbazol--dihidroklorid (a színárnyalatok sárgától tintakéken keresztül feketéig terjednek). 10. példa Szűrőpapírt egy alábbi összetételű oldattal itatunk át és 50 C -on szárítjuk: 1 mólos citrátpuffer (pH 6) 9-(|3-dimetilaminoetil)-3--aminokarbazol-dihidroklorid o-tolidin glükózoxidáz (104 egység/mg) peroxidáz (63 egység/mg) nátriumlaurilszulfát etanol vízzel feltöltve 50,0 ml l,0g 0,4 g 0,3 g 0,06 g 0,1 g 33,0 ml 100,0 ml-re A tesztpapír a glükóztartalmú vizeletekkel sárgától barnás-olívon keresztül a zöldig terjedő színárnyalattal reagál. Különböző eredetű vizeletek, valamint acetecetsavtartalmú vizeletek azonos glükózkoncentrációnál színárnyalatban lényeges eltérést nem mutatnak. A 8-10. példában ismetetett tesztpapíroknak megfelelő, de a találmány szerinti indikátor helyett 9-etil-3-amino-karbazolt tartalmazó tesztpapíroknak glükóztartalmú vizeletekkel kapott színe függ a hőmérséklettől és így nem reprodukálható. 11. példa Tesztfilm glükóz kimutatására vérben alkotórészek: 5 polivinilacetátpropionát-diszperzió 45,0 g nátriumalginátnak 0,5 mólos 5,5 pH-jú foszfátpufferrel alkotott 1,85%-os oldata 35,0 g !0 nátriumnonilszulfát 5,0 ml vízben oldva 0,75 g glükózoxidáz (62,7 egység/mg) 0,189 g 10 ml vízben oldva 15 peroxidáz (68,8 egység/mg) 0,235 g o-tolidin 2,5 ml acetonban oldva 0,600 g 9-[(|3-hidroxietil)-aminokarboniletü^-3-aminokarbazol-hidroklorid 20 2,0 ml vízben oldva 0,035 g Ezeket az alkotórészeket alaposan összekeverjük, 300// rétegvastagságban PVC-fóliára felkenjük és 35 percig 60 C -on szárítjuk. A tesztfilmre glükóztar-25 talmú vért cseppentve és egy perc múlva letörölve, további két perc elteltével a következő, hőmérséklettől független, színreakciókat kapjuk: 60 mg% glükóz — barnás-piros, 30 120 mg% glükóz —barnapiros, 180 mg% glükóz - sötétolív, 240 mg% glükóz és még több glükóz - különböző színmélységű zöld. 35 Az 1. ábra 20 C -on és 35 C -on egy kereskedelmi forgalomban levő remissziós fotométerrel mért kalibrációs görbéket mutat. 40 45 50 55 60 65 Mint az ábrából kitűnik, a találmány szerinti új indikátorral bizonyos hőmérséklet-intervallumban reprodukálható értékek kaphatók, a 20 és 35 C°-on kapott görbék csaknem azonosak. Ezzel szemben azonos módon előállított és azonos összetételű, de a találmány szerinti indikátor helyett 9-etil-3-aminokarbazolt tartalmazó tesztfilmnél - bár glükóztartalmú vénei gyakorlatilag azonos színt mutat - a szín függ a hőmérséklettől és így nem reprodukálható (vö. 165 789 sz. magyar szabadalmi leírás, 2. ábra). 12. példa Olyan 11. példa szerinti tesztfilmek, amelyek 0,035 g 9-[(0-hidroxietil)-aminokarboniléter]-3-aminokarbazol-hidroklorid helyett 0,025 g 9-(/3-karbamidoetil)-3-aminokarbazolt (A), vagy 0,034 g 9-(/3-dimetilaminoetil)-3-aminokarbazol-dihidrokloridot (B) tartalmaznak, glükóz-tartalmú vérrel, hőmérséklettől független reakcióban, a következő színárnyalatokkal reagálnak:
