169437. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szedatív hatású peptidek előállítására
11 < 169437 12 A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa H-Met-Glu-His-D-Phe-OH-acetát előállítása a) Boc-Met-Glu(OtBu>His-D-Phe-OtBu 2,34 g 25 ml dimetilformamidban oldott Boc-Met-Glu(OtBu>His-N2 H 3 -hoz az oldatnak 0C°-ra való hűtése után hozzáadunk 2,3 ml tetrahidrofuránnal készült 5,2 n sósavoldatot, majd -20 C -ra való hűtés után 0,54 ml izoamilnitritet. Az elegyet 20 percen át keverjük -20 C -on, majd hozzáadunk 1,7 ml trietilamint és 0,86 g H-D-Phe-OtBu 20 ml dimetilformamiddal készített oldatát, majd a pH-t 6,8-ra beállítjuk. Az elegyet 70 órán át keverjük 0 C -on, majd szűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot etilacetát-víz elegyben feloldjuk és vízzel kétszer mossuk. A szerves fázist szárítjuk, majd bepároljuk. A maradékot etilacetát-petroléter elegyből kristályosítjuk. Kitermelés: 2,44 g (80%). Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben [4 : 3/4 : 1/4 : :1] = 0,91, szilíciumdioxidon. b) Védőcsoportok eltávolítása 1 g, az a) lépés szerint kapott tetrapeptidet feloldunk 10 ml 90%-os trifluorecetsavban. A keletkező oldatot 30 percen át 20 C°-on állni hagyjuk, majd cseppenként hozzáadjuk 100 ml peroxidmentes éterhez. A keletkező csapadékot káliumhidroxid felett szárítjuk, 25 ml t-butanol-víz (1:1) elegyben feloldjuk és elkeverjük acetát-alakban levő Dowex X-8 ioncserélővel. Szűrés után a szűrletet liofílizáljuk. Kitermelés: 0,6 g acetát. Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben (2 : 3/4 : : 1/4 :1) = 0,32, szilíciumdioxidon. 3. Az 1. és 2. lépés szerint eljárva az alábbi peptid-acetátokat állíthatjuk elő Boc-Met-Glu-(OtBu)-His-N2 H 3 -ból és H-D-Phe-OC j! H2 3 -ból, H-D-Phe-OMe-ből vagy D-amfetaminból kiindulva: H-Met-Glu-His-D-Phe-OCi i H 2 3 acetát Rfx 0,45 H-Met-Glu-His-D-Phe-OMeacetát Rf" 0,39 H-Met-Glu-His-D-Amf-acetát Rf xx 0,30 xRf Bu : Py : Ac : víz rendszerben [2 : 3/4 :1/4 : 1], szilíciumdioxidon. xxRf Bu : Py : Ac : víz rendszerben [4 : 3/4 :1/4 :1], szilíciumdioxidon. 2. példa a) H-Met-Glu-His-D-Phe-OH oxidációja a megfelelő szulfoxiddá 5 Az 1. példa szerinti módon előállított tetrapeptid 0,06 mmól mennyiségét feloldjuk 2,5 ml ecetsavban, majd hozzáadunk 15/A 30%-os hidroeénperoxidot. Az elegyet 1 órán át keverjük 20 C -on, 10 majd hozzáadjuk 20 mg platinakorom 2,5 ml jégecettel készített szuszpenzióját, ezután az elegyet további 30 percen át keverjük. Szűrés után a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot 10 ml t-butanol-víz (1:1) elegyben 15 feloldjuk és liofílizáljuk, majd a keletkező szulfoxidot foszforpentoxid felett tároljuk. Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben (4 : 3/4 :1/4 : : 1) = 0,22, szilíciumdioxidon. 20 b) H-Met-Glu-His-D-Phe-OH oxidációja a megfelelő szulfonná Az 1. példa szerinti módon előállított tetrapeptid 0,2 mmól mennyiségét 0,5 ml víz, 0,1ml 4n 25 perklórsav és 0,02 ml 0,5 mólos ammóniummolibdát elegyében feloldjuk, majd hozzáadunk 0,06 ml 30%-os hidrogénperoxidot. Az elegyet 3 órán át keverjük 20 C -on, majd hozzáadunk 20 ml t-butanol-víz elegyet és acetát-alakban Jevő 30 Dowex X-8-t. Az elegyet egy órán át keverjük, majd szűrjük és a szűrletet liofílizáljuk. Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben [4 : 3/4 : : 1/4 :1] = 0,23, szilíciumdioxidon. 35 3. példa H-Met-Glu-His-D-Phe-Lys-OH-acetát a)Boc-Met-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Lys(Boc)-OH 40 1,17 g Boc-Met-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 -ot a megfelelő aziddá alakítunk az 1. a) példa szerinti módon. 0,9 g H-D-Phe-Lys(Boc)-OH [Rf Bu : Py : : Ac: víz rendszerben (4 : 3/4 :1/4 :1) = 0,30, szilí-45 ciumdioxidon] hozzáadása után az elegy pH-ját trietilamin hozzáadásával 7,l-re állítjuk be és a reakcióelegyet 0 C -on állni hagyjuk. A reakcióelegyet 70 órán át hagyjuk állni, majd szűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk és a 50 maradékot vizes etilacetátban felvesszük. A szerves fázist 4% nátriumklóridot tartalmazó vízzel mossuk, szárítjuk és vákuumban lepároljuk. A maradékot etilacetátban feloldjuk és petroléterrel hígítjuk. A keletkező csapadékot leszűrjük. 55 Kitermelés: 0,7 g. Rf Te : EtOH rendszerben (8:2) = 0,25, szilíciumdioxidon. b) H-Met-Glu-His-D-Phe-Lys-OH 60 Az a) lépésben kapott termék védőcsoportjait az 1. a) példa szerinti módon távolítjuk el, majd a terméket acetáttá alakítjuk, így pentapeptid-acetátot kapunk. 65 Kitermelés: 0,4 g 6
