169436. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és analitikai reagens haptének kimutatására és meghatározására
11 169436 12 diimidet tartalmazott. 5 perc múlva 50 mg glükózoxidázt oldottunk az előbbi keverékben, azután a reakciót 2 órán át folytattuk. Ezután az oldatot 0,05 mólos, 7,0 pH-jú foszfátpufferrel szemben dializáltuk hosszabb ideig. D) Fólsav meghatározása A meghatározást lényegében az 1 .D) példa szerinti módszerrel végeztük. Az enzimet az alábbiak szerint határoztuk meg: 0,5 ml enzimtartalmú oldatot összekevertünk 2,5 ml szubsztrát-oldattal (50 mg glukóz, 10 jug peroxidáz és 1 mg 5-aminoszalicilsav 0,05 mólos 6,0 pH-jú foszfátpufferben), azután az extinkciót 30 perc múlva mértük 400nm-nél. Az e meghatározási módszer, amelyben az MBSA-folát elleni antitesteket FGO-val kombinálva használtuk, 3—20-szor kevésbé volt érzékeny, mint az a meghatározási módszer, ahol az antitesteket PGO-val kombináltuk. Az érzékenység eltérése minden antiszérumnál más és más volt. 5. példa Ösztrogén meghatározása A) 1 la-OH-ösztron-11 -szukcinil-HRP, 1 la-OH-ösztron-11-glutaril-HRP, 1 la-OH-ösztradiol-11--szukcinil-HRP és 1 la-OH-ösztradiol-11--glutaril-HRP előállítása E vegyületeket az l'.A) példa szerinti módon állítottuk elő. Az ösztrogén-származékokat molekulasúlyuknak megfelelő mennyiségben használtuk. B) ösztrogén meghatározása A meghatározást a fent említett négy E-HRP konjugáttal végeztük, és az l.B) és l.C) példában leírt, lla-OH-ösztradiol-11-szukcinil-BSA által indukált antiszérumot használtuk. A meghatározások érzékenységét az alábbi táblázatban szemléltetjük: 20 35 40 45 Az ösztrogén-HRP 50%-ának az antitesthez való kötődését megakadályozó ösztrogén-mennyiség ng/ml E-HRP konjugát E, 10 E2 -ll-szukcinil-HRP (technika állása) E2 -l 1-glutaril-HRP (találmány szerinti) E, -11 -szukcinil-HRP 15 (technika állása) Er l 1-glutaril-HRP (találmány szerinti) >1 000 >1 000 >1000 8 >1 000 5 80 , 0.8 6. példa ösztrogén meghatározása 25 A) ösztradiol-17-szukcinil-HRP és ösztriol-16,17--diszukcinil-HRP előállítása E vegyületeket az 1.A) példa szerinti módon állítottuk elő, figyelembe véve az ösztrogén-szár-30 mazékok molekulasúlyát. B) Anti-(ösztradiol-l 7-szukcinil-BSA) és anti: (ösztriol-16,17-diszukcinil-BSA) előállítása Ezeket az antiszérumokat az l.A) és l.B) példákban leírt módszerrel állítottuk elő. C) ösztrogén meghatározása Az ösztrogén meghatározáshoz az ösztrogén-HRP konjugát és az antiszérumok négy lehetséges kombinációját használtuk, és az l.D) példa szerinti módon jártunk el. A két antiszérummal kapcsolatos eredményeket az alábbi táblázatban szemléltetjük: Az ösztrogén-HRP 50%-ának az antitesthez való kötődését megakadályozó ösztrogén-mennyiség ng/ml Antiszérumot indukáló anyag E2 -17-BSA E3 -16,17-BSA konjugát E2 -17-HRP E 3 -16,17-HRP E 2 -17-HRP E 3 -16,17-HRP (technika állása) (találmány szerinti) (találmány szerinti) (techika állása) ösztron ösztradiol ösztriol >300 6 30 100 >300 16 30 150 >300 70 100 300
