169402. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefem-karbonsav-származékok előállítására
17 ^t69402 18 V, táblázat folytatása < S A termék hozama különböző időpontokban, millimólban (a reakció kezdetétől számított percekben) Maximális konverzió % Konverzió a reakció végén % 15 60 90 120 180 240 20 x 60 4 19,4 51,3 56,0 56,2 56,4 57,4 58,0 73 73 5 10,5 25,0 30,6 34,2 37,0 32,4 31,3 31 26 6 18,1 49,0 59,0 67,7 78,0 85,2 91,2 76 76 A táblázat adataiból látható, hogy míg a 7—ADCA konverziója 7-fenil-acetamido-3-dezacetoxi-cefalosporánsawá 25-31%, addig a 7-ADCA- 20 -észter konverziója 7-fenil-acetamido-3-dezacetoxi-cefalosporánsav-metil-szulfonil-etilészterré 68-76%. Az utóbbi terméket az alábbi módon különítjük el. A 6. számú kísérlet reakcióelegyéhez a reakció kezdete után 20 órával (ekkor 91 millimól terméket 25 tartalmaz) térfogatának ötszörös mennyiségében tetrahidrofuránt adunk majd a sejteket és az oldhatatlan fehérjéket centrifugálás útján elkülönítjük. A kapott felülúszó folyadékfázist csökkentett nyomáson bepároljuk 35 C -ot meg nem haladó hő- 30 mérsékleten. Miután a tetrahidrofuránt ledesztilláltuk, kristályok különülnek el. A kristályokat kiszűrjük, vízzel alaposan átmossuk és metanolból átkristályosítjuk. így 72%-os hozammal 7-fenil-acetamido-3-dezacetoxi-cefalosporánsav-metil-szulfonil- 35 -etilésztert kapunk, amelynek olvadáspontja 145-146 C°, forgatóképessége [a]ls = + l'fi (koncentráció 1%, oldószer metilénklorid) E}^m (260mju) = 159. A terméket mágneses magrezonanciaspektroszkópiai és infravörös spektroszkópiai 40 adatai alapján hiteles mintával is azonosítottuk. 3. példa Elkészítjük adott mennyiségű PAG és 7—ADCA-metil-szulfonii-etilészter vizes oldatát, és a kapott • oldat pH-értékét 6,0-ra beállítjuk. Ezután Escherichia coli (IFO-13502), az 1. példában ismertetett módon készített tenyészetéből az 1. példában ismertetett módon a sejteket elkülönítjük, mossuk, majd a fenti vizes oldat készítéséhez használt vízzel azonos térfogatú desztillált vízben a sejteket szuszpendáljuk. A kapott szuszpenziót a PAG és a 7-ADCA-metil-szulfonil-etilészter vizes oldatához adjuk, és az elegyet 37C°-on tartjuk, miközben pH-értéket 6,0 körül tartjuk 2 N sósavoldat autpmatikus pH-szabályzó berendezéssel végzett adagolása útján. A sejtkoncentrációt és a reakcióelegyben a szubsztrátumok koncentrációját az alábbi VI. táblázatban ismertetjük. A reakció lefutásának eredményeit az alábbi VII. táblázatban adjuk meg. A reakciótermék, azaz a 7-fenil-acetamido-3-dezacetoxi-cefalosporánsav-metil-szulfonil-etilészter kvantitatív meghatározását a 2. példában ismertetett módon végeztük. VI. táblázat A kísérlet sorszáma Sejtkoncentráció PAG koncentrációja 7-ADCA-észter koncentrációja 1 2 ötszörös1 * nyolc és félszeres 480 millimól 660 millimól 240 millimól 330 millimól 1) Az eredeti fermentlé koncentrációjára vonatkoztatva. VII. táblázat A kísérlet sorszáma A termék hozama a reakció kezdetétől számított percekben (millimól) A reakció összhozama 15 60 90 120 180 240 420 1 18 38 49 62 93 124 172 72 2 18 60 88 119 152 210 260 79 9
