169326. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására aktivészteres módszerrel katalizátorok hozzáadása útján
29 169326 30 A fentiekben kapott olajat 250 ml 8 :2 arányú dioxán-víz-elegyben feloldjuk és kevés timolftaleint adunk hozzá. Ezután 1 n nátriumhidroxid oldattal mindaddig titráljuk, míg az oldat hosszabb ideig kék marad. 1 n NaOH-fogyás 179 ml. Végül 5%-os 5 káliumhidrogénszulfát oldattal az elegyet semlegesítjük és a reakciókeveréket bepároljuk. A maradékot vízben oldjuk. A vizes oldat fölé etilacetátot rétegzünk és jeges hűtés közben 2 n kénsáwal 2-3 pH-értékig megsavanyítjuk és jól összekeverjük. Az io etilacetátos fázist leválasztjuk, egyszer vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfát felett megszárítjuk és bepároljuk. A maradékot éterben oldjuk és lúgos kémhatásig ciklohexilamint adunk hozzá. Ezután jégbe alítjuk, leszívatjuk, éterrel mossuk és szá- 15 rítjuk. Hozam 55,6g (71,8%), olvadáspont 198-200 C°. További tisztítás céljából az anyagot 100 ml 20 metanolban oldjuk, 1,5 ml étert keverünk hozzá és lehűtjük. 1 óra eltelte után az oldatot leszívatjuk. Hozam 45,5 g (59%), olvadáspont 204-205 C°. [a]*,2 =+17,4 (c= 1, metanolban). b) Z-Val-GluíOBuVGlnOVIblO-OH 65,2 g (81 mmól) a Chem. Ber. 103, 2038 (1970) közöltek szerint előállított Z-Val- 30 -GLu(OBu*)-Gln(Mbh)-OMe-t körülbelül 400 ml 8 :2 arányú dioxán-víz-elegyben szuszpendáljuk és 1 n nátriumhidroxid oldattal timolftalein indikátorra titráljuk. Miután az oldat hosszabb ideig kék marad a káliumhidrogénszulfátos oldatot megsava- 35 nyitjuk és a csapadékot leszívatjuk. A szűrőn maradt terméket acetonnal felforraljuk, leszívatjuk és dimetilformamid/víz segítségével oldás-kicsapás útján tisztítjuk. Hozam 59 g (92%), olvadáspont 215-218 C" 40 * Analízis a C4 2H 5 4N 4 0u képletre (mólsúly 790,9) alapján: számított: C = 63,72%, H = 6,85%, 45 N = 7,05%, talált: C =63,3%, H =7,1%, N = 8,1%. 50 c) H-Val-GluíOBu'í-GbíMbhí-OH 52 g (65,7 mmól) Z-Val-Glu(OBu')-Gln(Mbh)-OH kevés Pd/BaS04 katalizátort tar- 55 talmazó 500 ml jégecetban készült szuszpenzióján keresztül mindaddig vezetünk hidrogéngázt, míg a további C02 fejlődés megszűnik. A katalizátort ezután leszívatjuk és a szűrletet bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük és leszívatjuk. A 60 csapadékot nátriumacetát oldattal körülbelül 5 óra hosszat keverjük, leszívatjuk és szárítjuk. A reakcióelegyet végül még metanollal felforraljuk. Hozam 27 g (62,6%), olvadáspont 226-228 C°. I«]D = +9.0° (c = 1, jégecetben). 65 Analízis a C34H48N4O9 képlet (mólsúly 656,8) alapján: számított: C = 62,20%, H = 7,35%, N = 8,53%, talált: C =61,4%, H =7,3%, N = 8,5%. d) Boc-Gly-Ile-Val-GluíOBu'í-GlnOvlblO-OH 7,8 g (20 mmól) Boc-Gly-Ile-OH • CHA-t 0C -on 100 ml éter és 40 ml 2 n citromsav oldat között keveréssel megosztjuk. Az éteres fázist leválasztjuk, vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és bepároljuk. Hozam 4,6 g olaj. 3,9 g fentiekben kapott olaj (Boc-Gly-Ile-OH) 35 ml dimetilacetamidban készült oldatához 2,09 g 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-l ,2,3-benzo-triazjnt és 0C°-on 2,76 g diciklohexilkarbodiimidet adunk. A reakcióelegyet 1 óra hosszat 0 C -on és 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. A kivált csapadékot leszívatjuk és kevés dimetilacetamiddal mossuk. A szűrlethez ezután 5,85 g finomra dörzsölt H-Val-GluíOBuVGlníMbhJ-OH-t adunk és 5 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. Eközben sűrű csapadék válik ki. A csapadékot éjjelen át állni hagyjuk, majd másnap 300 ml vízzel az anyagot teljesen kicsapjuk. A kicsapott anyagot \emvatjuk, vízzel mossuk és 200 ml etanollal felforraljuk. Forralás után szobahőmérsékletre engedjük lehűlni és leszívatjuk. Alkohollal alaposan kimossuk. Hozam 6,7 g (81,3%), olvadáspont 253-255 C°. [áfa2 =-2,1° (c = 1, dimetilacetamidban). Analízis a G47H70N6O13 képlet (mólsúly 927,1) alapján: számított: C =60,90%, H =7,61%, N = 9,07%, talált: C =61,0%, H =7,6%, N = 9,2%. e) H-Gly-Ile-Val-Glu-Gln-OH 200 mg Boc-Gly-Ile-Val-Glu(OBu')-Mbh-OH és 0,5 ml anizol keverékét 5 ml trifluorecetsavban feloldjuk és 10 percig visszafolyató hűtő alatt forraljuk. Végül bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. Az eldörzsölt keveréket leszívatjuk és a maradékot vízben oldjuk. A vizes oldatot acetát-formájú „Amberlite IR45" műgyantával elkeverjük, míg az elegy 3-4 pH-értékű lesz. A kationcserélőt leszívatjuk és a szürletet aktívszénnel derítjük. A tiszta vizes oldatot fagyasztva szárításnak vetjük alá. Hozam: 50 mg [afa2 = -75° (c = 0,25, vízben). A termék vékonyréteg-kromatográfiai analízis alapján egységes. A vékonyréteg-kromatogram [Szilikagélen, n-butanol/piridin/víz/ecetsav (70 :15 : 15 : 2) rendszerben]. Aminosav-analízis: lásd a 4. sz. táblázat. 15
