169326. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására aktivészteres módszerrel katalizátorok hozzáadása útján

169326 A 3 4 2-hidroxipiridin nátriumsójának azonban az a hátránya, hogy erős lúgos kémhatása van és az érzékeny peptidmolekulánál racemizálódást okozhat, így pl. gázkromatográfiai racemizálási kísérletek alapján ténylegesen arra az eredményre jutottunk, hogy a 2-hidroxipiridin nátriumsója racemizáló hatást fejt ki. Azt találtuk, hogy a fenilészter-típusú aktivált észterek aminolízise savas, 3,7 és 4,2 közötti pK-értékű heterociklusos N-hidroxi-vegyületek hozzáadásával rendkívül erősen akként meggyorsítható, hogy egyébként több napos reakcióidőt igénylő peptidszintézisek néhány perc leforgása alatt befejezhetők. Ha a Z-Val-ciklohexilamid szintézisénél Z-Val-Onp és ciklohexilamin moláris mennyiségeiből indulunk ki és a különböző N-hidroxilvegyületek hozzáadásával összehasonlíthatók a felezési idők és a pK-értékek Z-Val-ciklohexilamid szintézisénél, és a felezési idők összehasonlításával az N-hidroxi vegyületek pK-értéktől függő katalitikus hatása (vö. 1. táblázat, kísérleti rész) különösen jól kimutatható. A találmány tárgya eljárás kívánt esetben védett peptidek előállítására aktívészteres módszerrel, valamely kívánt esetben N-védett aminosav- vagy peptid-aktívészternek valamely aminosavval vagy szabad aminocsoportot tartalmazó peptiddel — amelynek karboxil-csoportja észterezett, amidált vagy polimer hordozóanyaghoz kapcsolt — történő reagáltatása útján, azzal jellemezve, hogy valamely II általános képletű aminosavat vagy védett pepiidet — ahol V valamely peptidkémiában szokásos aminovédő-csoport, vagy a piroglutamil-csoport, Y valamely rövidszénláncú alkilcsoport, amely adott esetben elágazó szénláncú, és/vagy kívánt esetben célszerűen védett hidroxil-, amino-, merkapto-, karboxil-, karboxamido-, guanidino-, aril-, imidazol- vagy indolil-gyökkel van helyettesítve, mimellett az -NH-CH(Y)-csoport pirrolidinil-csoportot is jelenthet, R di-, tri-, tetra- vagy pentaklórfenil- illetve nitro-csoporttal vagy klór- és nitro-csoporttal helyettesített fenil-csoport, mi Ö—10 közötti szám — valamely kívánt esetben az N-terminálisán védett III általános képletű aminosavval vagy peptiddel — ahol Y és —NH-CH(Y)- csoport jelentése a fenti, m2 =0-1500, Whidroxíl-, -O-alkil-, -O-aralkil- vagy valamely adott esetben alkil-, aralkil- vagy aril-csoporttal helyettesített amino-csoport, vagy alkilészterrel, aralkilészterrel, acilmetilészterrel, vagy benzhidrilamiddal a polimer hordozóanyaghoz kapcsolt csoport— 0,1 — 1,0 mólekvivalens mennyiségű, valamely 0,5 mólos oldatban 6:4 arányú dietilénglikol-dimetiléter-víz oldószerelegyben 30 C -on mérve 3,7 - 4,2 pK értékű I általános képletű vegyület hozzáadásával - ahol X szubsztituens karbonil-, tiokarbonil-csoport, vagy —N= atom, Xés N adott esetben benzolgyűrűvel anellált és/vagy egy vagy két további nitrogénatomot tartalmazó 5- vagy 6-tagú, adott esetben 1-2 szénatomos alkil- vagy alkoxi-csoporttal vagy ha-5 logénatommal helyettesített heterociklusos gyűrű tagjait képezheti — reagáltatunk és kívánt esetben a kapott IV általános képletű védett pepiidről a védőcsoportot részben vagy tel!0 jesen, ismert módon lehasítjuk. A találmány szerinti eljárás sikeres kivitelezése szempontjából az adalékanyagok pK-értéke döntő jelentőségű. A pK-mérést a kísérleti részben leírtak szerint hajtjuk végre. Ha a nevezett rendszerben az 15 I általános képletű vegyületek pK-értéke nagyobb (mint N-hidroxipiperidin esetében) vagy alacsonyabb (mint pl. l-hidroxi-6-nitro-benzotriazol esetében), akkor a katalitikus hatás erősen lecsökken. Általában 0,1 -kb. 1 ekvivalens mennyiségű 20 N-hidroxi-vegyülettel dolgozunk, azonban ennél kisebb vagy nagyobb mennyiség is felhasználható. A katalízishez alkalmas vegyületeket többek között a következőkben soroljuk fel: 1-hidroxi-benzo-25 -triazolok, mint pl. l-hidroxi-5,6-dimetü-benzo-triazol, l-hidroxi-5-metil-benzo-triazol, l-hidroxi-6-metil-benzo-triazol, 1 -hidroxi- 5-metoxi-benzo-triazol, 1 -hidroxi-4-metil-benzo-triazol, 1 -hidroxi-6-bróm-benzo-triazol, l-hidroxi-6-klór-benzo-triazol, 1-hidr-30 oxi-5-klór-benzo-triazol, ciklusos hidroxámsavak, mint pl. piridonok, l-hidroxi-2-piridon, 1-hidroxi-4-metil-2-piridon (2 540 218 számú USA szabadalmi leírás), l-hidroxi-4,6-dimetil-2-piridon, 1-hidroxi-3,4,6-trimetil-2-piridon (738 288 számú belga 35 szabadalmi leírás), l-hidroxi-3,5-diklór-4,6-dimetil-2-piridon, N-hidroxi-szukcinimid vagy l-hidroxi-2--oxo-2,3-dihidro-indolok, mint pl. az l-hidroxi-6--klór-2-oxo-2,3-dihidro-indol [J. Amer. Chem. Soc. 78, 222 (1956)], ciklusos hidroxámsavak, amelyek 40 a gyűrűben heteroatomként nitrogén-atomot tartalmaznak, mint 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-kinazolin, 3-hidroxi-2-metil-4-oxo-3,4-dihidro-kinazolin, 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-l ,2,3-benzo-triazin, 3-hidroxi-4-oxo-2-fenil-3,4-dihidro-kinazolin [J. Chem. Soc. 45 2157-2160 (I960)], ciklusos hidroxámsavak, amelyek a gyűrűben heteroatomként oxigén- vagy kén-atomot tartalmaznak, mint pl. a megfelelő módon helyettesített 4-hidroxi-3,4-dihidro-3-oxo-l,4,2--benzoxazinok és 4-hidroxi-3,4-dihidro-3-oxo-1,4,2-50 benzo-tiazinok, vagy a ciklusos tiohidroxámsavak, mint pl. a 3-hidroxi-4-metil-2,3-dihidro-tiazol-2-tion, amelyek szintén felhasználhatók. Az I általános képletű vegyület szubsztituenseiként az 1—2 szénatomos alkil- vagy alkoxi-gyökök, 55 halogén-atomok főként klór-atom jön számításba. A III általános képletű amino-komponens szabad vagy ásványi savval, illetve erős vagy gyenge szerves savval mint pl. p-toluolszulfonsawal, trifluorecet-sawal vagy ecetsavval készült só alakjában kerül 60 felhasználásra. Ha a sóképzés erős savval történt, akkor az amino-csoport felszabadításához egy tercier szerves bázist, mint trietilamint vagy N-etilmorfolint kell alkalmazni. Ilyen N-hidroxi-vegyület egy sójának hozzáadása, mint pl. az 1-hidroxi-ben-65 zo-triazol-nátriumsó alkalmazása is lehetséges. Itt az 2