169321. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív kondroitinszulfát előállítására porctartalmú szervekből

7 169321 S 1. példa lkg sertésgégét megtisztítás után 4 mm átmérőjű tárcsanyilású húsdarálón felaprítunk, és ' 1 liter 2 mól töménységű nátriumklorid-oldattal - a közeg vegyhatásának sósav-oldattal pH = 5,5 értékre állítása mellett - szobahőmérsékleten 5 órán át keverve kivonatolunk. A szuszpenziót centrifugáljuk, a felülúszót döntjük. Az üledéket 700 ml 0,5 mól töménységű nátriumklorid-oldatban vesszük fel, és 20 Anson E proteáz és 280 000 SKB E amiláz aktivitásának megfelelő mennyiségű enzimport (Chinozym N.P. Chinoin, Budapest) adunk hozzá 200 ml vízben oldva és Seitz-lapon átszűrve. A közeg vegyhatását nátrium-hidroxid-oldattal pH 8 értékre emeljük, és az oldatot 5b C°-ra melegítve 3 órán át keverjük. Ezt követően a kondroitinszulfát-tartalmú kivonatot szűréssel különítjük el a szervmaradéktól. A zavaros szűrletet szobahőmérsékletre hűtjük, majd vegyhatását sósav-oldattal pH = 6,5 értékre állítjuk. Hozzáadunk 100 g derítőföldet, és 1 órán át keverjük, majd centrifugáljuk. A felülúszóval a deritési lépést 50 g derítőföld hozzáadásával még egyszer megismételjük. A felülúszó oldathoz a térfogat 2,5-szeresének megfelelő mennyiségű etilalkoholt adunk, majd néhány órai állás után centrifugálással elkülönítjük a kondroitinszulfát-tartalmú csapadékot. A csapadékot 750 ml 0,5 mól töménységű nátriumklorid-oldatban oldjuk fel, 3-szoros térfogatú etilalkohollal kicsapást végzünk, majd a csapadékot etilalkohollal és acetonnal szárítjuk. A kapott termék súlya 22 g. összaktivitása: lipoprotein-lipáz aktiválásra nézve 330 E, fibrinolízis aktiválásra nézve 2300 E. [Az egység (E) definícióját lásd az 1. táblázat alatt.] 2. példa 500 g 1. példában leírt módon felaprított sertés-gégét 0,5 liter 1 mól töménységű nátriumklorid-oldattal, melynek vegyhatását sósav-oldattal pH6-ra állítottuk, szobahőmérsékleten 6 órán át keverünk, majd centrifugálunk. A felülúszó elöntése után az üledéket 350 ml 0,5 mól töménységű nátriumklorid-oldatban vesszük fel, és 10 Anson E proteolitikus aktivitásnak megfelelő mennyiségű 10 Pankreatint (Kőbányai Gyógyszerárugyár, Budapest)! adunk hozzá. A VI. Magyar Gyógyszerkönyvi minősítésben 3-szoros hatáserősségű Pankreatin esetén az említett, proteolitikus aktivitás mellett legalább 120000 SKBE amflolitikus aktivitás van jelen.) A közeg vegyhatását nátriumhidroxid-oldattal pH 7,5 értékre állítjuk be, és 45 C°-on keverve kivonatoljuk. A szuszpenziót centrifugáljuk és a kondroitinszulfátot tartalmazó felülúszót elkülönítjük. Ennek további feldolgozásában az 1. példában leírt módon járunk el. Termelés: 9,8 g [123 E lipoprotein-lipázt fokozó és 330 E flbrinolízist fokozó aktivitással]. IS 3. példa 1 kg marha porcos orrsövény felaprítását és feldolgozását az 1. példában leírt módon végezzük el. Termelés: 23 g [172 E lipoprotein-lipázt fokozó és 400 E fibrinolízist fokozó aktivitással]. 20 25 30 35 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás biológiailag aktív kondroitinszulfát előállítására porc-tartalmú szervekből frakcionáló kioldás, a hatóanyagot tartalmazó kivonat derítése, majd a hatóanyag kicsapása útján, azzal jellemezve, hogy a frakcionáló kioldást pH = 4-7,5 értéken, 0,1-3 mól töménységű vizes-alkálifém-halogenid-oldattal végzett kivonatolással, az oldatlan rész elkülönítésével, majd proteáz- és amiláz-tartalmú enzimkeverék jelenlétében pH = 7-8 értéken, 0,2 - 1 mól töménységű vizes alkálifém-halogenid-oldattal történő kezeléssel végezzük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a kivonatolást 1 mólos nátriumklorid-oldattal pH = 5,5 értéken, 40 15-25 C°-on végezzük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy enzimkeverékként minden kg kiindulási szervre számítva 15—25 Anson E proteáz és 100 000-400 000 SKBE amiláz 45 aktivitású keveréket használunk és a kezelést 45-50 C° hőmérsékleten 0,2 - 1 mólos nátriumklorid-oldattal végezzük. A kiadásért felel: » Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 774103 - Zrínyi Nyomda 4