169317. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükoamiláz előállítására encomycopsis bispora tenyészetből

MAGTAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1973. IX. 21. (FO-684) Közzététel napja: 1976. VI. 28. Megjelent: 1977. VII. 30. 169317 Nemzetközi osztályozás: C12D 13/10 Feltalálók: Prof. dr. Ruttloff Heinz oki. élelmiszervegyész, dr, Taeufel Alfred oki. élelmiszervegyész, Bergholz-Rehbrücke, dr. Zickler Fritz oki. biológus, Potsdam, dr. Kupke Günter oki. biológus, Jena, dr. Schierbaum Friedrich oki. vegyész, dr. Richter Manfred oki. vegyész, Potsdam, dr. Huber Johann oki. biológus, Eichwalde, dr. Riedel Kalus oki. biológus, Berlin, Német Demokratikus Köztársaság Tulajdonos: Forschungsinstitut für die Gärungsindustrie Enzymologie und Technische Mikrobiologie, Berlin, Német Demokratikus Köztársaság Eljárás glükoamiláz előállítására endomycopsis bispora tenyészetből 1 A találmány tárgya biológiai eljárás glükoamiláz előállítására, amely enzimes keményítőkonverzióhoz alkalmazható. Ismeretes, hogy a mikroorganizmusok, különösen az Aspergillus-, Rhizopus-, és Endomycopsis nemzetségek - glükoamilázt termelnek. A fenti cél elérésére Endomycopsis nemzetség alkalmazása esetén a süllyesztett, illetve felületi tenyészetben C- és N-forrásként búzakorpát (magában vagy keményítővel elegyítve), rizskorpát, a két komponens keverékét, szójabablisztet, peptont és sörcefrét alkalmaznak. 10 Az 1 380 854 számú francia szabadalmi leírás szerint a glükoamilázhozamot azáltal növelik, hogy 15 a fenti tápanyagokhoz növényi olajokat és zsírokat adnak. A 60 536 számú NDK szabadalmi leírás alapján ismeretessé vált, hogy az Endomycopsis spec, nemzetség egyik kukoricalekvár-keményítő-foszfát-tartalmú táptalajban tenyésztett törzsénél 20 akkor érnek el nagyobb glükoamiláz-aktivitást, ha a tenyésztést az alábbiak szerint kivitelezik: a legalább 14 napos sörcefre-ferdeagar-tenyészetet egy Wickerham-féle talajba átoltják, majd a keletkezett micéliumot egy keményítő-kukoriealekvár-fosz- 25 fát-tartalmú táptalajba viszik át, 24-28 órán át 25-30 C° hőmérsékleten tenyésztik és ezután 24-48 órás periódusokban további oltási lépcsők következnek. A leírásban említett Wickerham-féle táptalaj összetétel a következő: 0,4% maláta, 0,3% 30 élesztőkivonat, 0,4% tripton és 1,0% -glükóz. A komponenseket vízben oldják, majd a pH-értéket 1 n ecetsavval 5,0-re állítják be. Abban az esetben, amikor nagyobb enzimhozam elérésére a táptalajhoz olajadalékokat adtak, az Endomycopsis spec, tenyésztési ideje 10-15 nap volt. Ez az időtartam túl hosszú ahhoz, hogy fenti mikroorganizmusokat a termelésben alkalmazhassák. Az általunk kivitelezett vizsgálatok alapján megállapítottuk, hogy a zsírok és olajok autoxidatív állapotát jellemző indexek (karbonilszám, peroxidszám) közül a peroxidszám dönti el, hogy ezek az anyagok a fenti célra alkalmazhatók-e. Célszerűen a peroxidszám ne legyen kimutatható. Megállapítottuk továbbá, hogy *az organoleptikai szempontból kifogástalan, azonban már mérhető peroxidszámmal rendelkező olajok az enzimhozamot jelentősen csökkentik. Ugyanez érvényes a különböző zsírsavkeverékekre. Vizsgálataink szerint az 1 380 854 számú francia szabadalmi leírásban közölt magas glükoamiláz-aktivitás rizskorpa tartalmú táptalajt alkalmazva a rizskorpa tokoferoltartalmán alapul. A 60 536 számú NDK szabadalmi leírás szerint az Endomycopsis bispora meghatározott, azonban közelebbről nem ismert körülmények hatására a hifaforma mellett sarjadzó micéliumokat is képez. Az utóbbi lényegesen kisebb hozamot eredményez. 169317