169161. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükozidhidroláz inhibitorok előállítására az Actinomycetales rendbe tartozó törzsekkel

MAGTÁR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 169161 JÉÉlÉL Nemzetközi osztályozás: ISI Bejelentés napja: 1971. XII. 28. (BA-2686) C12D 13/10, C 07 G 7/028 jpí: Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: ^^ 1970. XII. 28. (P 20 64 092.0) Módosítási elsőbbsége: 1973. XI. 26. (18189) •' ••' •'•'-'.'.•"?•'. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1976. V. 28. Megjelent: 1978.1.31. Feltalálók: dr. Frommer Werner mikrobiológus, dr. Puls Walter orvos, Wuppertal-Elberfeld, Schaefer Dietmar vegyész, Neuhof, dr. Schmidt Delf vegyész, Wuppertal-Vohwinkel, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: . BAYER Aktiengesellschaft, Leverkusen, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás glükozidhidroláz inhibitorok előállítására az Actinomycetales rendbe tartozó törzsekkel 1 Ismeretes, hogy az a-amilázok különböző kismolekulájú anyagokkal, így pl. a szalicilsawal és abiszcizinnel inhibitálhatók (T. Hemberg, J. Larsson, Physiol. Plant. 14, 861 (1961), T. Hemberg, Acta Chem. Scand. 21, 1665 (1967)]. Ismeretes 5 továbbá, hogy léteznek olyan nagy molekulájú anyagok is, amelyek néhány amiláz aktivitásának gátlására képesek fizikai adszorpcióval [T. Chrzaszcz, J. Janicki, Bioch. Z. 260, 354 (1933) és Bioch. J. 28, 296 (1934)], nem specifikusan vagy pedig 10 az enzim denaturalásával és kicsapásával [B. S. Miller, E. Kneen, Arch. Biochem. 15, 251 (1947), D. H. Struhmeyer, M. H. Malin, Biochem. Biophys. Acta 184, 643 (1969)]. Megfigyelték továbbá, hogy a búzából desztillált vízzel egy olyan anyag 15 eluálható, amely a nyálban levő amiláz dextrinképző aktivitását csökkenti, azonban csak kissé befolyásolja a pankreászamiláz aktivitását [E. Kneen, R. M. Sandstedt, Arch. Bioch. 9, 235 (1946)]. 20 A leírt anyagok hátránya, hogy az amilázok gátlása nem specifikus vagy pedig a leírt anyagok gátló aktivitása különösen a pankreászomilázokkal szemben — amint azt saját kísérleteink mutatták — csekély. Ez azt jelenti, hogy csak nagyon nagy 25 inhibitor: enzim arányok esetén érhető el az amilázok csaknem teljes (legfeljebb 90%-os és ennél nagyobb) gátlása. A 2 003 934 és 2 028 739 sz. NSZK-beli nyilvánosságrahozatali iratban ismertetett találmány 30 tárgyát amiláz-inhibitorok képezik. Az ott leírtak szerint búzából (búzadara, búzaliszt vagy siker) előnyösen savas pH-értékeken vizes elektrolit-oldatokkal, előnyösen híg savakkal vagy mindenekelőtt víz és 1—3 szénatomos alkoholok elegyeivel jó kitermeléssel extrahálható egy olyan nagy aktivitású pankreász-amiláz inhibitor, amely a fenti hátrányokkal nem rendelkezik. Ez az így nyert anyag a pankreászamilázt 90% fölött inhibitálja már nagyon alacsony inhibitor : enzim arány esetén is. Azt találtuk, hogy előnyösebb módon állíthatók elő az ismerteknél nagyobb hatású glükozidhidroláz inhibitorok mikrobiológiai úton, az Actinomycetales rendbe tartozó mikroorganizmus-törzsekkel lefolytatott fermentáció és a fermentleben termelt inhibitor kinyerése útján. A találmány szerinti mikrobiológiai eljárás előnye a fenti idézett Német Szövetségi Köztársaság-beli nyilvánosságrahozatali iratokban, valamint az ezeknek megfelelő 161 577 számú magyar szabadalmi leírásban ismertetett, búzalisztből, búzadarából vagy sikerből kiinduló eljárással szemben, hogy lényegesen gazdaságosabb és technológiailag is kedvezőbb, ugyanakkor a találmány szerinti mikrobiológiai eljárással előállított inhibitor in vivo nagyobb aktivitást is mutat a főzött keményítővel etetett kísérleti állatokban, összehasonlításul az alábbi adatok szolgálhatnak: 169161