169158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag hatásos peptidek előállítására - antidepresszáns
21 169158 22 5. A fent leírttal egyező módon állítjuk elő az alábbi hasonló termékeket is: H-Phe-D-Lys(Boc)-Amf Rf = 0,39 H-Phe-D-Ly<Boc)-PEA Rf = 0,34 H-Phe-D-Lys(Boc)-HPEA Rf = 0,29 A fenti Rf-értékeket szilikagélen határoztuk meg, a toluol-etanol 8 : 2 rendszerben. Az alábbi példák a találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait szemléltetik közelebbről: 1. példa H-Met-Glu-His-Phe-D-Arg-OH és a megfelelő metilészter előállítása 1. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Arg-OH 1,17 g Boc-Met-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 (előállítva az a) példa 2. szakaszában leírt módon) 20 ml dimetil-formamiddal készített oldatát 0 C° hőmérsékletre hűtjük, majd 3 ml tetrahidrofurános 2 n sósavoldatot adunk hozzá, az elegyet —20 C°-ra hűtjük és ezen a hőmérsékleten 0,27 ml izoamü-nitritet adunk hozzá. Az elegyet -20 C° hőmérsékleten 7 percig keverjük, azután hozzáadjuk 0,76g H-Phe-D-Arg-OH-acetát [előállítva a H) példa 3. szakaszában leírt módon] oldatához és az elegy pH-értékét trietil-aminnal-7,2-re állítjuk. Az elegyet 0 C° hőmérsékletre 70 óra hosszat keverjük, majd a dimetil-formamidot vákuumban ledesztilláljuk, a maradékot vizes etilacetátban oldjuk és a szerves oldószeres oldatot vizes nátrium-klorid-oldattal háromszor mossuk. Az elkülönített etilacetátos oldatot bepároljuk és a maradékot vízmentes etilacetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. így 1,2 g Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Arg-OH terméket kapunk, amelynek Rf -értéke 0,56 (butanol-piridin-ecetsav-víz 2 : 0,75 : 0,25 :1 rendszerben). 2. A védőcsoportok eltávolítása 1 g peptidet 10 ml 90%-os trifluor-ecetsavban oldunk, majd az oldatot 30 percig keverjük. A reakcióelegyet ezután belecsepegtetjük peroxidmentes éterbe. A képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük és éterrel eldörzsöljük. Az így kapott szilárd terméket elkülönítjük és szilárd kálium-hidroxid felett megszárítjuk. A terméket azután 25 ml terc-butanol-víz elegyben oldjuk, majd acetát-fázisban levő Dowex X-8 gyantát adunk hozzá a trifluor-acetát-ionok acetát-ionra való kicserélése céljából. A végső pH-érték 4—5. Az ioncserélő gyantát azután szűréssel elkülönítjük és a szűrletet liofilizáljuk. Hozam: 0,7 g. Az így kapott termék Rf -értéke 0,18 (szilikagélen, a 2 :0,75 :0,25 : 1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz rendszerben). 3. Az 1. és 2. bekezdésben ismertetett módon a Boc-Met-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 peptidet [A) 2. példa] a H-Phe-D-Arg-OMe peptiddel [H) 4. példa] kapcsoljuk, majd a védőcsoportokat lehasítjuk. így H-Met-Glu-His-Phe-D-Arg-OMe-acetátot kapunk, amelynek Rf-értéke 0,22 (szilikagélen, butanol-piridin-ecetsav-víz 4 : 0,75 :0,25 :1 rendszerben). 12. példa H-Met-Glu-His-Phe-D-Lys-OH előállítása 5 1. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D -Lys(Boc)-OH 1,17 g Boc-Met-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 peptid-hidrazidot [A) 2. példa] 20 ml dimetil-formamidban oldunk, majd az oldatot 0 C° hőmérsékletre hűtjük, 10 3 ml tetrahidrofurános 2 n sósavoldatot adunk hozzá, majd -20 C° hőmérsékletre történő lehűtés után 0,27 ml izoamü-nitritet adunk az elegyhez. Az elegyet 2 percig keverjük, majd hozzáöntjük 0,9 g H-Phe-D-Lys(Boc)-OH [K) 2. példa] 10 ml dimetil-formamid-15 dal készített oldatához, majd a reakcióelegy pH-értékét trietilamin hozzáadása útján 7,2-re állítjuk. Az elegyet 0 C° hőmérsékleten 70 óra hosszat keverjük, majd a dimetil-formamidot ledesztilláljuk és a maradékot vizes etilacetátban oldjuk. 20 A szerves oldószeres fázist elkülönítjük, nátrium-kloridot tartalmazó vízzel, majd tiszta vízzel mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A kapott maradékot etilacetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. 25 Rf 0,27 (szilikagélen, a tolulo-etanol 8 : 2 rendszerben). Hozam: 1,4 g. 2. A védőcsoportok eltávolítása 30 A védőcsoportokat ugyanolyan módon távolítjuk el, amint ezt az 1. példa 2. bekezdésében ismertettük, csupán azzal az eltéréssel, hogy a trifluor-ecetsawal való keverést 1 óra hosszat folytatjuk. 35 Rf 0,19 (szilikagélen, butanol-piridin-ecetsav-víz 4 :0,75 :0,25 : 1 rendszerben). 3. A fent leírttal egyező módon állítjuk elő az alábbi hasonló peptideket: 40 H-D-Met-Glu-His-Phe-D-Lys-OH, a B) 2. és K) 2. példa szerinti kiindulási anyagokból Rf 0,18 (szilikagélen, a butanol-piridin-ecetsav-víz 45 4 : 0,75 :0,25 :1 rendszerben). H-0-Ala-Glu-His-Phe-D-Lys-OH, a D) 2. és K) 2. példa szerinti kiindulási anyagokból Rf 0,16 (szilikagélen, a butanol-piridin-ecetsav-víz 50 4 :0,75 : 0,25 :1 rendszerben). H-Val-Glu-His-Phe-D-Lys-OH, a C) 2. és K) 2. példa szerinti kiindulási anyagokból Rf 0,18 (szilikagélen, a butanol-piridin-ecetsav-víz 55 4 : 0,75 :0,25 : 1 rendszerben). Dezamino-Met-Glu-His-Phe-D-Lys-OH, az F) 3. és K) 2. példa szerinti kiindulási anyagokból Rf 0,26 (szilikagélen, a butanol-piridin-ecetsav-víz 60 4 : 0,75 :0,25 : 1 rendszerben). H-Met-Gln-His-Phe-D-Lys-OH a G) és K) 2. példa szerinti kiindulási anyagokból Rf 0,25 (szilikagélen, a butanol-piridin-ecetsav-víz 65 4 : 0,75 : 0,25 :1 rendszerben). 11
