169136. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezoxi-amino-glükozidok előállítására amino-glükozidok dehidroxilezésével
13 169136 14 Optikai forgatóképesség [aß 4 = +40,0° (kon- 2. példa centráció: 0,60%, oldószer víz). A termék Rf értéke 0,55 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Merck — Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amely kloroform : metanol : 28%-os ammónium-hidrox>: -oldat : víz (4:3:2:1) elegy felső fázisának 5 térfogatrészéből és 3 térfogatrész metanolból áll. A kontrollanyagként alkalmazott szabad xilosztazin Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,23. A fenti termék további pontos elemzési adatainak mérése céljából a xilosztazin-3'-foszfát-monohidrátot acetilezzük, amikor is tetra-N-acetil-xilosztazin-3'-foszfát-dihidrátot kapunk, amelynek elemzése az alábbi: 10 15 Elemzési képletre: eredmények a C25H43O17P • számított: talált: C =40,65%, N = 7,59%, C =40,95%, N = 7,70%, H = 6,41%, P =4,19%, H = 6,52%, P =4,16%. 2H2 0 számított: talált:" C =41,54%, N =11,37%, C =41,23%, N =11,08%. H =8,18%, H =7,95%, té4 =+28,0° (kon-Optikai forgatóképesség [a centráció: 0,16%, oldószer víz). A termék Rf értéke 0,26 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Merck—Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amely kloroform : metanol : vizes ammónium-hidroxid-oldat : víz (4:3:2:1) elegy felső fázisának 5 térfogatrészéből és 3 térfogatrész metanolból áll. A kontrollanyagként alkalmazott szabad xilosztazin Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,23. 20 25 20 térfogatrész vízben feloldunk 0,2 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-xilosztazint, majd az oldathoz 2,5 térfogatrész Raney-nikkelt és 0,3 térfogatrész trietil-amint adunk. Ezt követően a kapott keveréket hidrogénáramban szobahőmérsékleten és atmoszférikus nyomáson rázzuk 6 órán át, majd a katalizátort kiszűrjük. A katalizátort ezután alaposan átmossuk 150 térfogatrész 1 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal, majd a mosófolyadékot egyesítjük a szűrlettel, és az így kapott elegyet mintegy 20 térfogatrész térfogatra betöményítjük. A képződött csapadékot kiszűrjük, míg a szűrletet 30 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50 - NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot vízzel mossuk és gradiens-eluáljuk 0 és 0,5 N között változó normalitású vizes ammónium-hidroxid-oldatokkal. A 3'-dezoxi-xilosztazint tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, amikor is 0,152 súlyrész 3'-dezoxi-xilosztazin-trihidrátot kapunk. Elemzési eredmények a C17H34N4O9 • 3 H20 képletre: 30 35 40 0,3 sülyrész neomicin B-3'-foszfát-pentahidrát, 2,7 térfogatrész trimetil-szilil-klorid, 1,2 térfogatrész hexametil-diszilazán, 2,25 térfogatrész vízmentes piridin és 0,21 súlyrész trifenil-foszfin keverékét olajfürdőn 115C°-on hevítjük 44 órán át, majd a reakció befejeződése után a reakcióelegyhez jéggel végzett hűtése közben 30 térfogatrész metanolt adunk. Ezt követően a reakcióelegyet csökkentett nyomáson betöményítjük. A koncentrátumhoz 100 térfogatrész desztillált vizet adunk, és a vizes elegyből az oldhatatlan anyagot szűrés útján eltávolítjuk, míg a szűrlethez 100 térfogatrész vizet és 100 térfogatrész etil-acetátot adunk. Ezután az elegyet alaposan rázzuk, majd a vizes fázist elválasztása után csökkentett nyomáson betöményítjük a benne oldódott etil-acetát eltávolítására. A vizes fázist ezután 90 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite IRC-50-NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot 500 térfogatrész desztillált vízzel mossuk, majd 300 térfogatrész 1 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. Az eluátumot csökkentett nyomáson betöményítjük, amikor is 0,25 súlyrész nyers terméket kapunk. A terméket 50 térfogatrész desztillált vízben feloldjuk, majd a kapott vizes oldatot 30 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50I - NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot 100 térfogatrész desztillált vízzel mossuk, és ezt követően 0 és 0,3 n között változó normalitású vizes ammónium-hidroxid-oldatokkal (gradiens-eluálás) eluáljuk. Az így kapott nyers terméket ismételten kationcserélőgyantán (Amberlite CG-50 - NH4 + ionokkal töltött állapotban) adszorbeáltatjuk, majd a gyantát 0 és 0,3 közötti normalitású vizes ammónium-hidroxid-oldatokkal eluáljuk. Az eluátumot csökkentett nyomáson betöményítjük, majd liofilizáljuk. A fenti módon 0,195 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-neomicin B-dihidrátot kapunk. Elemzési eredmények a C2 3H 45 N 6 Oi2Cl •' • 2H2 0 képletre: 50 55 60 65 számított: C =41,28%, H =7,38%, N =12,55%, Cl = 5,29%, talált: C =41,03%, H = 7,29%, N = 12,41%, Cl = 5,35%. A termék Rf értéke 0,47 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Merck — Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amelynek összetétele kloroform : metanol : vizes ammónium-hidroxid-oldat :víz (1:4:2:1). A kontrollanyagként alkalmazott szabad neomicin B Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,29. A kiindulási anyagként használt neomicin B-3'-foszfát-pentahidrátot a The Journal of Antibiotics, 21,22(1968) irodalmi helyen ismertetett módszerhez hasonló módon állítottuk elő, amikor is az Escherichia coli K 12 ML 1629 mikroorganizmus nyers enzim-oldatát a neomicin B-re hatni hagytuk. Fajlagos forgatóképesség [aß 4 = +63,3° (koncentráció: 1,02%, oldószer víz). 7
