169022. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kopolimer hordozóra felvitt vízoldhatatlan fehérje-készítmények előállítására
13 169022 14 1 c) példa 40 ml ureáz 32 ml vízben készült oldatában 400 mg 1 a) példa szerint előállított hordozógyantát szuszpendálunk. Állandó keverés közben szoba- 5 hőmérsékleten az 1 n nátriumhidroxid hozzáadásával állandó 6 pH értéket tartunk fenn. 16 óra eltelte után a reakció befejeződik, a gyantát leszívatjuk és az 1 b) példa szerinti módon pufferoldattal mossuk. 10 Eredmény: Enzimatikus aktivitás 15 Kiindulási oldat: 168 U Felülúszó rész és mosóoldatok: 64,5 U Hordozógyanta a reakció után: 87 U, vagyis a kiindulási aktivitás 52%-a. 20 Az ureáz enzimatikus aktivitását 0,12 mólos karbamid szubsztrátummal titrimetriás úton 25 C°-on és 6,1 pH-értéken határozzuk meg. 1 egység (U) megfelel olyan enzim-mennyiségnek, amely 1 mik- 25 romol karbamidot vagyis 1 perc leforgása alatt 2 mikromól karbamidot vagyis 1 perc leforgása alatt 2 mikromól sósavat fogyaszt. 30 1 d) példa 100 mg tripszin 32 ml 0,02 mólos kalciumkloridban készült oldatában 500 mg 1 a) példa szerint előállított hordozógyantát szuszpendálunk. Állandó 35 keverés közben 4 C°-on a pH-értéket 1 n nátriumhidroxid hozzáadásával állandó pH = 6,3 értéken tartjuk. 16 óra eltelte után a gyantát leszívatjuk és az 1 b) példa szerinti módon pufferoldattal mossuk. 40 Eredmény: Enzimatikus aktivitás 45 Kiindulási oldat: 110 U Felülúszó rész és mosóoldatok: 15,6 U Hordozógyanta a reakció után: 64 U, vagyis a kiindulási aktivitás 58%-a. 50 Az enzimatikus aktivitást Tuppy szerint [Z. Physiol. Chem. 329 (1962) 278] benzol-arginin-p-nitroanilid (BAPNA) szubsztrátummal mérjük. 1 egység (U) 25 C°-on és 7,8 pH-értéken 1 mikromól szubsztrátum elbontására képes 1 perc lefor- 55 gása alatt. 2 a) példa 60 80 g tetrametilénglikol-dimetakrilát, 10 g metakrilsav, 10g maleinsavanhidrid és lg azo-izovajsavnitril 1 liter benzolban készült oldatát lassú keverés közben 4 óra hosszat 60 C°-on, 2 óra hosszat 70C°-on és 1 óra hosszat 80C°-on polimerizáljuk. 6 ? A kapott polimereket leszűrjük, benzollal háromszor kikeverjük, petroléterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. Hozam: 70g Térfogatsúly: 7,0 ml/g Duzzadási térfogat, vízben: 8,2 ml/g Fajlagos felület: 5,3 m2 /g Savtartalom az anhidrid-csoportok elszappanosítása után = 2,55 milliekvivalens/g. 2 b) példa 1 g 2 a) példa szerint előállított polimert az 1 b) példával analóg módon penicillin-acilázzal 33 ml vízben 6,3 pH-értéken reagáltatunk. Eredmény: Enzimetikus aktivitás (NIPAB-teszt) Kiindulási oldat: 118 U Felülúszó rész és mosóoldatok: 21 U Hordozógyanta a reakció után: 82 U, vagyis a kiindulási aktivitás 69%-a. 3 a) példa 60 g tetraetilénglikol-dimetakrilátot 30 g metakrilsavat, 10g maleinsavanhidridet és lg azo-izovajsavnitrilt 300 ml acetonitrilben feloldunk. Az oldatot 5 g glicerin mono- és -dioleát keveréket tartalmazó 1 liter 100-140 C° határok között levő benzinben szuszpendálunk és 22 óra hosszat 60C°-on polimerizáljuk. A kapott gyöngy alakú polimert leszűrjük, háromszor benzolban, végül kétszer 30-50 C° közötti forrásponthatárú petroléterben szuszpendáljuk, majd vákuumban szárítjuk. Hozam: 94 g fehér golyó alakú termék Térfogatsúly: 4,4 ml/g Duzzadási térfogatsúly vízben: 5,5 ml/g Fajlagos felület: 5,6m2 /g Átlagos részecskeátmérő: 200/i Savtartalom az anhidrid-csoportok elszappanosítása után = 4,3 milliekvivalens/g. 3 b) példa 1 g 3 a) példa szerint előállított polimert az 1 b) példával analóg módon penicillin-acilázzal 33 ml vízben 6,3 pH-értéken reagáltatunk. Eredmény: Enzimatikus aktivitás (NIPAB-teszt): Kiindulási oldat: 118U Felül úszó rész és mosóoldatok: 43 U Hordozógyanta a reakció után: 96 U, vagyis a kiindulási aktivitás 81%-a. 7
