169022. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kopolimer hordozóra felvitt vízoldhatatlan fehérje-készítmények előállítására

21 169022 22 13 b) példa lg 13 a) példa szerint előállított polimert az 1 b) példával analóg módon 32 ml vízben penicilíin-acilázzal 6£ pH-értéken reagáltatjuk. 5 Eredmény: Enzimatikus aktMtá* (NIPAB-teszt) Kiindulási oWat: 107 U Felülúszó rész és mosóoldatok: 60 U Hordozógyanta a reakció után: 24 U, vagyis a kiindulási aktivitás 22%-a. 10 15 17. hasítás 18. hasítás 19. hasítás 20. hasítás 21. hasítás 22. hasítás 23. hasítás 24. hasítás 25. hasítás 26. hasítás 27. hasítás 28. hasítás 29. hasítás 30. hasítás hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: =hozam: 90,3% 89,9% 89,8% 89,1% 91,7% 91,9% 91,6% 91,1% 91,8% 90,7% 91,7% 91,4% 90,8% 90,3% 90,95% 14. példa 76,1 kg (ne3ves súly) 4 b) példa szerint előállított 737 000 U (NIPAB-teszt) aktivitású hordozó- 20 hoz rögzített penicillin-acilázt és 125 kg G-penicillin-káliumot (tisztasági foka 98%) egymás után 2000 liter vízhez adunk és 38 C°-on keverjük. A reakciókeveréket trietilamin folyamatos hozzáadásával 7,8 állandó pH-értéken tartjuk. 8 óra eltelte 25 után a reakcióelegy további trietilamint már nem vesz fel. A hordozóhoz rögzített penicillin-acilázt lecentrifugáljuk, mindenkor 60 liter vízzel és 80 liter 0,2 mólos 6,5 pH-értékű foszfátpufferrel utánamossuk és a további penicillin elbontási reak- 30 ciókeverékben alkalmazzuk. A szűrletet a mosóvízzel együtt vákuumban 300 liter térfogatra bepároljuk. A 6—APS-t a 4,3 pH-értéknek megfelelő izoelektromos ponton félig koncentrált sósav hozzáadásával 200 liter memetilizobutilketon jelenlétében 35 kicsapjuk. 1 óra állás után a reakcióelegyet leszűrjük, 200 liter vízzel, majd 200 liter acetonnal utánamossuk. A reakciókeveréket vákuumban 40 C°-on szárítjuk, a termék olvadáspontja 208 C°, hozam: 66,7 kg, vagyis 91,9%, tisztasági fok: 98%. 40 A hordozóhoz rögzített penicillin-acilázt egymás után összesen 30 penicillin hasítási reakciókeverékben alkalmazzuk. Még a 30. hasítás után sem állapítható meg, hogy a hordozóhoz rögzített penicillin-aciláz elhasználódott volna. A reakcióidő nem 45 változik. A feldolgozást az előbbiek szerint végezzük. Az elért 6-APS-hozamokat a következő összeállításban soroljuk fel: 15. példa 330 g hordozóhoz rögzített 1 b) példa szerint előállított 3410 U enzimatikus aktivitású (NIPAB-teszt) penicillin-acilázt és 129 g G-penicillin-káliumot egymás után 2000 ml vízhez adjuk, majd a ' 14. példában leírt módon 38 C°-on és 7,8 pH-értéken keverjük. A G-penicillint 2 óra leforgása alatt teljesen 6-APS és fenilecetsav termékekké hasítjuk. A hordozóhoz rögzített penicillin-acilázt hússzor egymás után használjuk fel a hasítási reakcióhoz. Még 20 hasítás után sem szükséges a reakcióidőt a teljes hasításhoz meghosszabbítani. Az elért 6-APS hozamokat az alábbi összeállításban soroljuk fel: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. hasítás hasítás hasítás hasítás hasítás hasítás hasítás 8. hasítás 9. hasítás 10. hasítás 11. hasítás Í2. hasítás 13. hasítás 14. hasítás 15. hasítás 16. hasítás hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: hozam: 91,9% 91,4% 91,6% 91,0% 91,2% 90,3% 91,5% 90,9% 91,9% 90,7% 91,2% 90,1% 90,9% 90,7% 91,0% 90,2% 50 55 60 65 1. hasítás 2. hasítás 3. hasítás 4. hasítás 5. hasítás 6. hasítás 7. hasítás 8. hasítás 9. hasítás 10. hasítás 11. hasítás 12. hasítás 13. hasítás 14. hasítás 15. hasítás 16. hasítás 17. hasítás 18. hasítás 19. hasítás 20. hasítás 16. példa 67.5 g 68,4 g 68.7 g 68.6 g 68,4 g 68,1 g 68.7 g 68.4 g 68.5 g 68,1 g 68.5 g 68.6 g 68,5 g 68,1 g 68.3 g 67.8 g 68,0 g 67.4 g 67.5 g 66.8 g (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: (hozam: =hozam: 90,1%) 91,1%) 91,9%) 91,5%) 91,0%) 90,8%) 91,6%) 91,2%) 91,5%) 90,9%) 91,3%) 91,7%) 91,3%) 90,8%) 91,1%) 90,5%) 90,6%) 89,9%) 90,0%) 89,1%) 90,89% 120 g (nedves súly) 4 b) példa szerinti 1160 U aktivitású (NIPAB-teszt) hordozóhoz rögzített penicillin-acilázt 120 g G-penicillin-káliummal 1300 ml vízhez adjuk és 9 óra hosszat 38 C°-on, és 7,8 pH-értéken a 14. példa szerint keverjük. A feldolgozást a 14. példa szerinti módon végezzük. A hordozóhoz rögzített penicillin-acilázt ötször egymás után alkalmazzuk enzimatikus hasításhoz. Az elért 6—APS hozamokat az alábbi összeállításban soroljuk fel: 11