168721. lajstromszámú szabadalom • Vizuális módszer a szifilisz és egyéb, treponémák által okozott betegségek kimutatására

5 168721 6 gálatot ténylegesen végezzük. Ha a flokkulálószer már jelen van a lemezen, nem szükséges további flokkulálószert adni a vizsgálat végrehajtásához felhasznált antigén készítményhez. A vizsgálatot általában úgy végezzük, hogy a lemezt, miután cseppenként felvittük az antigén készítményt és a szérumot, összerázzuk. A rázást például 64,5 cm2

felületű vízszintes korongon végezhetjük, amely kissé excentrikus mozgást végez percenként körülbelül 80-240 löket ütemben. A rázást végezhetjük kézzel is. A találmány szemléltetésére az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákat adjuk meg. 1. példa U. S. R. próba Antigénként 0,03 súly% kardiolipin, 0,9 súly% koleszterin és 0,21 +0,01 súly% lecitin alkoholos oldatát használjuk. Ez á standard V. D. R. L. antigén és a standard, pufferolt konyhasó-oldat hígítószer a V. D. R. L. antigén reagens előállításához a kereskedelemben beszerezhető. Nem melegített szérum reagin (U. S. R.) próba. Az U. S. R. antigén-színezék reagens előállítása. A) 0,1 mólos EDTA-oldat: 3,72 g etiléndiamintetraecetsav-dinátriumsót feloldunk desztillált vízben oly módon, hogy a végső térfogat 100 ml legyen. B) 40%-oskolinklorid-oldat: 250 g kolinkloridot desztillált vízben feloldunk oly módon, hogy a végső térfogat 625 ml legyen. Ezután szűrjük és szobahőmérsékleten tároljuk. C) 0,2 súlyszázalékos foszfát-mertiolát-oldat: 1,42 g dinátríumhidrofoszfátot 1,36 g káliumdihidrofoszfátot és 1,00 g nátrium-etil-merkuri-tioszalicilátot desztillált vízben feloldunk oly módon, hogy a végső térfogat 500 ml legyen, pH-ja 6,9. Szuszpendáló oldat: A) oldat 1 súlyrész B) oldat 2 súly rész C) oldat 4 súlyrész desztillált víz 1 súlyrész Antigén szuszpenzió előállítása: A V. D. R. L. kereskedelemben kapható pufferolt konyhasó oldatának 1,6 ml-ét 30 ml-es lapos fenekű, üveg-fedelű edény aljára pipettázzuk. 2,0 ml antigént adunk cseppenként körülbelül 6 másodperc alatt közvetlenül a konyhasó oldathoz. Az edényt ezután egy sima felületen folyamatosan, azonban gyengén forgatjuk, miközben az antigént beadagoljuk. Az utolsó cseppet kifújjuk anélkül, hogy a pipetta a konyhasós oldat felületéhez érne. Az edényt további 10 másodpercen át forgatjuk. Ezután hozzáadunk 16,4 ml standard pufférolt konyhasó-oldatot, és az edényt lezárva körülbelül 10 másodperc alatt 30-szor az edény alját felfordítva felrázzuk. A keletkező termék az alábbiakban felhasznált V. D. R. L. antigén szuszpenzió. A kapott V. D. R. L. antigén szuszpenziót szobahőmérsékleten, centrifugán 15 percen át centrifugáljuk körülbelül 2000 g gyorsuláson. A felülúszó folyadékot az edény elfordításával dekantáljuk. Az 5 edény belsejét gyapot gézzel kitöröljük anélkül, hogy az üledéket megsértenénk, eközben a csövet fordított helyzetben tartjuk. Ezután az üledéket a fenti szuszpendáló oldatban újra szuszpendáljuk ugyanolyan térfogatú oldatot használva, mint az aii-10 tigén szuszpenzió eredeti részletének szuszpendálásakor, amelyet centrifugáltunk. Ha a centrifugáláshoz egynél több csövet használunk, azok tartalmát öszegyűjtjük és vigyázva összekeverjük. így U. S. R. antigént kapunk. A fenti I képletű „Sudan Black", 15 amelyet Sudan Black-C. 1. (Colour Index Vol. V.) No. 26150-nek neveznek, 1%-os alkoholos oldatának 0,07 ml-ét lassan hozzáadjuk az U. S. R. antigénhez, miközben az antigént gyengén rázzuk. Vizsgálathoz használható antigén készítményt kapunk. 20 Reagin antitest kimutatása (U. S. R. próba): A vizsgálatot nem melegített szérum vagy plazma mintákon végezhetjük, bár hővel inaktivált minták 25 is megfelelőek. Valamely, kereskedelemben beszerezhető fehér vizsgáló lemezre felvisszük a fenti antigén készítményt 1/60 ml-ét és a szérum 50 ul-ét. A keveréket keverőbottal vagy egyéb eszközzel rövid ideig ke-30 verjük, majd a lemezt klinikai rotátorra helyezzük és 6 percen át forgatjuk percenként 130 fordulat sebességgel. Pozitív szifilisz próba esetén fekete színű, összetömörülő antigén színezék részecskék láthatók az izzólámpa beeső sugarában vizsgálva. Negatív 35 reakció esetén a reagensek nem tömörülnek össze diszkrét részecskékké, hanem homogén szuszpenzióban maradnak. 2. példa Antigén készítés: 45 A fenti V. D. R. L. antigén szuszpenzióhoz a II és I képletű színezék (Basic Brown-C. I. (Colour Index) No. 21030 és Sudan Black-C. I. (Colour Index) No. 26150) 1 .-1 arányú 0,1%-os alkoholos oldatának 0,04 ml-ét adjuk. Vizsgálathoz használható antigén 50 készítményt kapunk. Reagin antitest kimutatása (V. D. R. L. próba): Betegségre gyanús személy vérsejtjeiből plazmát 55 nyerünk ki és 30 percen át melegítjük 56 °C-on. A minta 50 uliterét és a fenti V. D. R. L. antigén készítmény 1/60 ml-ét kereskedelemben kapható fehér vizsgáló lemezre visszük fel. Összekeverés után a lemezt klinikai rotátorra helyezzük és az 1. példa 60 szerinti módon forgatjuk. Pozitív szifilisz próba esetén fekete színű, összetömörülő antigén-színezék részecskék láthatók az izzólámpa beeső sugarában vizsgálva. Negatív reakció esetén a reagensek nem tömörülnek össze diszkrét részecskékké, hanem ho-65 mogén szuszpenzióban maradnak. 3