168696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új noapeptidamid-származékok előállítására
168696 15 16 keverjük. A csapadékként kivált DC-karbamidot szűrjük, a DMF-et pedig csökkentett nyomáson elpároljuk. A maradékot 0,2 súlyrész karbamiddal együtt feloldjuk 4 térfogatrész 5%-os vizes etanolban és az oldatot Amberlite XAD-2 oszlopon adszorbeáljuk, majd arról 5%-os vizes etanol 80%-os vizes etanol lineáris gradiensű rendszerrel eluáljuk.jA kívánt terméket tartalmazó főfrakciót liofilizálva, 0,067 súlyrész H-(Pyr)GIu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-NLe-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 5 -őt kapunk. E termékből 0,060 súlyrésznyi mennyiséget 0,05 térfogatrész anizol és 0,02 térfogatrész 2-merkapto-etanol jelenlétében —50 °C-on feloldunk 4 térfogatrész hidrogénfluoridban és az oldatot 0 °C-on 1 órán át keverjük. A hidrogénfluoridot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradékot nátriumhidroxidot tartalmazó szárítószekrényben szárítjuk. A száraz maradékot feloldjuk 20 térfogatrész vízben és az oldatot átbocsátjuk Amberlite CG-400 (acetát-ciklus oszlopon. Az oszlopról kilépő oldatot liofilizáljuk, majd karboximetilcellulóz oszlopra visszük, amelyről lineáris gradiensű 0,005 n ammónium-acetát- 0,2 n ammónium-acetát lineáris gradiensű rendszerrel eluáljuk. A kívánt terméket tartalmazó főfrakciót liofilizálva 0,035 súlyrész terméket kapunk. Ezt a terméket most Sephadex LH-20 oszlopra visszük, majd arról 0,1 n ecetsavval oldjuk le. Az egynemű frakciót liofilizálva, 0,028 súlyrész tiszta H-(Pyr,(Glu-His-Trp-Ser-Tyr-GIy-HLe-Arg-Pro-NHC2H 5 CH 3 -öt kapunk, [ag? = -52,2° (c =0,5, 5%-os ecetsavban). Aminosavelemzés: His 1,00 (1); Arg 1,20 (1); Trp 1,00 (1); Ser 0,91 (1); Glu 1,00 (1); Pro 1,05 (1); Gly 0,98 (1); Tyr 1,00 (l);NLe 1,02(1); 6. példa H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-GIy-Leu-Arg-Pro-NHC2H 5 előállítása a) Z-Ser-Phe-Gly-OC2 H 5 készítése 2,5 súlyrész Z-Phe-Gly-OC2 H 5 feloldunk 50 térfogatrész metanolban és az oldatot szénre felhordott 5% palládiummal 5 órán át katalitikusan redukáljuk. A katalizátort ezután szűréssel, az oldószert pedig desztillációval eltávolítjuk. A maradékot 20 térfogatrész DMF-ben oldjuk, az oldathoz 2,6 súlyrész Z-Ser-ODNP-t adunk, majd ezt követően, 8 órát át keverjük. Az oldószert kiűzzük és a maradékot etilacetátban oldjuk. Az oldatot nátriumhidrogénkarbonát 5%-os vizes oldatával, 1 n sósavval és vízzel mossuk, majd magnéziumszulfáton szárítjuk. Az oldószert kiűzzük és a szilárd maradékot etilacetát-petroléter elegyből kristályosítjuk. A kitermelés 1,75 súlyrész (74,2%); op.: 128—129 °C; [a]g = - 26,2° (c= 0,6, etanolban). Elemzés a C24 —H 29 0 6 N 3 képlet alapján: számított: C = 61,13, H=6,20, N=8,91; talált: C = 60,47, H=6,00, N=8,88. b) Z-Ser-Phe-Gly-NHNH2 készítése 1,65 súlyrész Z-Ser-Phe-GIy-OC2 H 5 -öt feloldunk 20 térfogatrész metanolban és az oldathoz hozzáadjuk a 0,71 térfogatrész hidrazinhidrátot. A reakciókeveréket 8 órán át állni hagyjuk. A kivált kristályokat szűrjük, 1: 1 arányú metanol-éter eleggyel végzett mosás után a kitermelés 1,6 súlyrész (100%); op.: 191—193 °C; [a]g = - 23,0° (c = 2, DMF-ben). Elemzés a C22 H 27 H 5 0 6 képlet alapján: számított: C = 57,76, H=5,95, N = 15,31; talált: C = 57,32, H=6,21, N = 15,53. 5 c) Z-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 5 készítése 0,8 súlyrész Z-Ser-Phe-Gly-NHNH2 -t feloldunk 10 térfogatrész DMF-ben és az oldatot lehűtjük, majd 3,5 térfogatrész 2 n sósavat adunk hozzá. Az oldathoz keve-10 rés közben, — 6 °C hőmérsékleten most 2 n vizes nátrium-nitrít oldatot adunk hozzá, és a keveréket 10 percig reagálni hagyjuk. Eközben a fenti módon kapott kristályos terméket 10 térfogatrész DMF hozzáadásával feloldjuk. A reakciókeverékhez telített vizes nátrium-15 klorid-oldatot adunk, majd a rendszert etilacetáttal kivonatoljuk. A kivonatot egyesítjük a mosóoldatokkal és az oldatot előbb nátriumhidrogénkarbonát 5%-os vizes oldatával, majd nátriumklorid telített vizes oldatával mossuk. Az etilacetátos réteget (80 térfogatrész) nátrium-20 szulfáton szárítjuk, majd hozzáadjuk 1,04 súlyrész H-Leu-Arg(N02)-Pro-NHC 2 H 5 DMF-ben készített, 20 térfogatrész mennyiségű oldatához. Az etilacetátot jeges fürdőn kidesztilláljuk és a kapott egynemű oldatot 3 °C-on 2 napon át keverjük. Az oldószert kiűzzük és a mara-25 dékot szilikagélen végrehajtott kromatográfiával tisztítjuk, 60: 20: 6: 10 arányú etilacetát-piridin-ecetsav-víz oldószert. A kívánt terméket tartalmazó főfrakciókat egyesítjük és desztillációval eltávolítjuk belőle az oldószereket. A maradékhoz vizet adunk és a kivált szilárd 30 anyagot szűrjük. A kitermelés 0,87 súlyrész (61,2%); op.: 108 °C; [ag? = - 59,1 (c = 0,7, etanolban). Elemzés a C^H^OJJNU • H2 0 képlet alapján: számított: C =54,72, H=6,83, N = 17,12; talált: C= 54,95, H=6,84, N = 16,74. 35 d) Z-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 5 készítése 0,836 súlyrész Z-Ser-Phe-GIy-Leu-ArgíNO^-Pro-NHC2 H 5 -öt feloldunk metanolba és az oldathoz 1 tér-40 fogatrész 1 n sósavat adunk. Az oldatot most palládiumkorom katalizátorral katalitikusan redukáljuk. A katalizátort a reakció befejeztével szűréssel, az oldószert pedig desztillációval eltávolítjuk. A maradékot feloldjuk 10 térfogatrész DMF-ben majd az oldatban 0,83 súly-45 rész H-(Pyr)Glu-His-Trp-OH-t és 0,36 súlyrész HONBI-t is oldunk. Az oldatot —5 °C-ra hűtjük és 0,412 súlyrész DCC-t adunk hozzá. A reakciókeveréket 2 napon keresztül hagyjuk reagálni. Ezután a keletkezett csapadékot szűrjük és a DMF-ot kiűzzük. A maradékot 50 Amberlite XAD-2 oszlop és 5%-os vizes etanol-80%-os vizes etanol lineáris gradiensű eluáló rendszer alkalmazásával kromatográfiásan tisztítjuk. A terméket tartalmazó főfrakciókat egyesítjük, az etanolt desztillációval eltávolítjuk, a visszamaradó vizes oldatot pedig liofili-55 záljuk. A kapott port karboximetilcellulóz oszlopon, 0,005 n vizes ammóniumacetát-0,1 n vizes ammóniumacetát lineáris gradiensű rendszerrel végrehajtott ioncserélő kromatográfiával tovább tisztítjuk. Az aktív frakciót liofilizálva, tiszta fehér port kapunk. A kiterme-60 lés 0,424 súlyrész. [<xg>2 = -55° (c=0,5, 5%-os ecetsavban). Aminosavelemzés: His 1,02 (1); Arg 1,01 (1); Trp 0,91 (1); Ser 0,90(1); Glu 1,00(1); Pro 1,00(1); Gly 0,98 (1); Leu 1,00 (1); Phe 1,00 (1); etil-amin 1,06 (1). 65 Annak érdekében, hogy a Trp hozamot megállapít-8
